研究提供了一种改善实体瘤 T 细胞疗法的潜在策略

宾夕法尼亚大学佩雷尔曼医学院的研究人员开展一项临床前研究的重点是一种提供“一击两击”以帮助 T 细胞攻击实体瘤的新方法。发表的研究结果表明，靶向控制炎症相关基因功能的两种调节因子可使模型中的 T 细胞扩增至少增加 10 倍，从而提高抗肿瘤免疫活性和持久性.

使用单向方差分析进行分析，然后进行 Tukey 的多重比较检验。(C) 在与间皮素阴性 K562 细胞共培养过夜后，激活标记 CD25 和 CD69 在 CD4（红色）或 CD8（蓝色）CAR-T 细胞和 UTD 对照上的表达。显示的图代表来自两个独立供体的两个独立实验，每个实验一式三份进行。(D) 通过 Luminex 测定法测量的 Th1 和炎性细胞因子（IL2、IFNg、TNFa、IL6 和 GM-CSF）的分泌。CAR-T 细胞和未转导的 (UTD) T 细胞对照与间皮素阴性 K562 细胞共培养过夜，收集上清液用于分析。显示的数据汇集自来自两个独立供体的两个独立实验，每个实验一式三份进行。误差条代表 SD。

CAR T 细胞疗法由 Carl H. June 医学博士、宾夕法尼亚大学免疫疗法教授 Richard W. Vague 和 Abramson 癌症中心细胞免疫疗法中心 (CCI) 主任首创2017 年 B 细胞急性淋巴细胞白血病的 CAR T 细胞疗法。从那时起，个性化细胞疗法彻底改变了血癌治疗，但对肺癌和乳腺癌等 实体瘤仍然无效。

“我们希望为实体瘤患者解锁 CAR T 细胞疗法，其中包括最常诊断的癌症类型，”新研究的资深作者 June 说。“我们的研究表明，免疫炎症调节剂靶向值得进一步研究以增强 T 细胞效力。”

CAR T 细胞疗法在实体瘤中的挑战之一是一种称为 T 细胞耗竭的现象，其中来自肿瘤细胞实体块的持续抗原暴露会耗尽 T 细胞，以至于它们无法安装抗肿瘤反应。为 CAR T 细胞疗法设计已经耗尽的患者 T 细胞导致产品效果较差，因为 T 细胞不能充分繁殖或记住它们的任务。

之前的观察性研究暗示炎症调节剂 Regnase-1 是间接克服 T 细胞衰竭影响的潜在靶标，因为它在 T 细胞中被破坏时会引起过度炎症——使它们复活以产生抗肿瘤反应。该研究团队，包括主要作者、工程与应用科学学院生物工程研究生 David Mai 和共同通讯作者、CCI T 细胞工程实验室负责人、哲学博士 Neil Sheppard，假设针对相关但独立的 Roquin -1 调节器同时可以进一步提高响应。

“这两个调节基因中的每一个都与限制 T 细胞炎症反应有关，但我们发现一起破坏它们比单独破坏它们产生更大的抗癌作用，”Mai 说。“通过在先前研究的基础上，我们开始接近在实体瘤背景下似乎有前途的策略。”

该团队使用 CRISPR-Cas9 基因编辑在健康供体 T 细胞中分别和一起敲除 Regnase-1 和 Roquin-1，其中两种不同的免疫受体目前正在 I 期临床试验中进行研究：靶向间皮素的 M5 CAR （ mesoCAR ) 和以 NY-ESO-1 为目标的 8F TCR (NYESO TCR)。两种工程化 T 细胞产品均未靶向 CD19，这是大多数获批 CAR T 细胞疗法靶向的抗原，因为该抗原不存在于实体瘤中。

在 CRISPR 编辑后，T 细胞被扩增并注入实体瘤小鼠模型，研究人员观察到与单独禁用 Regnase-1 相比，双敲除导致至少 10 倍的工程化 T 细胞，以及增强的抗肿瘤免疫活性和工程化 T 细胞的寿命。在一些小鼠中，它还会导致淋巴细胞过度生成，从而引起毒性。

“CRISPR 是一种有用的工具，可以完全消除 Regnase 和 Roquin 等靶基因的表达，从而产生清晰的表型，但是还有其他策略需要考虑将这项工作转化为临床环境，例如条件基因调控的形式，”谢泼德说。

“通过组合敲除这两种非冗余蛋白质，我们确实对抗肿瘤效力印象深刻。在实体瘤研究中，我们经常看到 CAR T 细胞的有限扩增，但如果我们能够使每个T细胞更有效，并将它们复制到更大的数量，我们预计 T 细胞疗法能够更好地攻击实体瘤。”