éžç»å…¸ Wnt ä¿¡å·åœ¨å‰åˆ—腺癌å°é¼ 模型ä¸ä»‹å¯¼é›„æ¿€ç´ ä¾èµ–性肿...
éžç»å…¸ Wnt ä¿¡å·åœ¨å‰åˆ—腺癌å°é¼ 模型ä¸ä»‹å¯¼é›„æ¿€ç´ ä¾èµ–性肿瘤生长摘è¦å‰åˆ—腺癌的å‘å±•ä¸Žè¿‡åº¦æ´»è·ƒçš„é›„æ¿€ç´ ä¿¡å·ä¼ å¯¼æœ‰å…³ã€‚ç„¶è€Œï¼Œé›„æ¿€ç´ å—体 (AR) åŠŸèƒ½ä¸Žä½“æ¶²å› å之间的分åè”ç³»ä»ç„¶éš¾ä»¥æ‰æ‘¸ã€‚通过 Cre-ER T2介导的é¶å‘体细胞诱å˜ï¼Œå°†å‰åˆ—腺上皮细胞ä¸çš„ AR è‹æ°¨é…¸ 877 选择性çªå˜ä¸ºä¸™æ°¨é…¸ï¼Œä»Žè€Œç”Ÿæˆäº†å‰åˆ—腺癌å°é¼ 模型。这ç§AR点çªå˜å°é¼ (AR pe-T877A/Y) å‘展为肥大的å‰åˆ—è…ºï¼Œå¯¹é›„æ¿€ç´ æ‹®æŠ—å‰‚å’Œé›Œæ¿€ç´ éƒ½æœ‰å应,尽管没有å‘现å‰åˆ—腺肿瘤。在å‰åˆ—è…ºç™Œæ¨¡åž‹è½¬åŸºå› å°é¼ ä¸ï¼Œé€šè¿‡å°† AR T877A çªå˜å¼•å…¥å‰åˆ—腺,å‰åˆ—腺肿瘤å‘生以åŠè‚¿ç˜¤ç”Ÿé•¿çš„å‘生显ç€å¢žå¼ºã€‚å°é¼ çš„åŸºå› ç›é€‰ç¡®å®š Wnt-5a 是一ç§æ¿€æ´»å‰‚。在患者的æ¶æ€§å‰åˆ—腺肿瘤ä¸æ£€æµ‹åˆ°å¢žå¼ºçš„Wnt-5a表达,而在良性å‰åˆ—腺增生ä¸è¿™ç§å¼‚常上调ä¸æ˜Žæ˜¾ã€‚这些å‘现表明,éžç»å…¸ Wnt ä¿¡å·ä¼šåˆºæ¿€ä¼´æœ‰ AR 功能亢进的å‰åˆ—腺肿瘤的å‘展。
é›„æ¿€ç´ å—体 (AR) 在å‰åˆ—腺癌å‘展
ä¸è‡³å…³é‡è¦ï¼Œå› ä¸ºé›„æ¿€ç´ è€—ç« æˆ–é›„æ¿€ç´ æ‹®æŠ—ä½œç”¨åœ¨ä¸´åºŠä¸ŠæˆåŠŸåœ°å‡å¼±äº†å‰åˆ—腺癌在其åˆå§‹é˜¶æ®µçš„生长。然而,大多数接å—æŠ—é›„æ¿€ç´ æ²»ç–—çš„æ‚£è€…æœ€ç»ˆä¼šè½¬å˜ä¸ºâ€œæ¿€ç´ 难治â€çŠ¶æ€ï¼Œè¿™ç§çŠ¶æ€é€šå¸¸å…·æœ‰æ”»å‡»æ€§å¹¶ä¸”ç»å¸¸è‡´å‘½ã€‚AR é¶åŸºå› 的上调也å‘生在过渡阶段。å‰åˆ—腺特异性抗原 (PSA) 的血清水平å‡é«˜ä¼´éšæ¿€ç´ 难治状æ€çš„å‘å±•ã€‚å› æ¤ï¼Œå¢žå¼º AR ä»‹å¯¼çš„é›„æ¿€ç´ ä¿¡å·ä¼ 导似乎预示ç€è‚¿ç˜¤è¿›å±•çš„开始,尽管其分å基础在很大程度上ä»ç„¶éš¾ä»¥æ‰æ‘¸ã€‚
AR æ˜¯æ ¸ç±»å›ºé†‡å—ä½“åŸºå› è¶…å®¶æ—çš„æˆå‘˜ï¼Œå¹¶ä½œä¸ºæ¿€ç´ ä¾èµ–æ€§è½¬å½•å› å。通过é…体结åˆæ¿€æ´» AR 在转录上控制é¶åŸºå› 的表达。与其他æˆå‘˜ä¸€æ ·ï¼ŒAR 在功能和结构上分为五个域,A-E。å—体蛋白ä¸é—´æœ€ä¿å®ˆçš„ C 结构域编ç DNA 结åˆç»“构域,而 C 末端 E 结构域包å«æ¿€ç´ /é…体结åˆç»“构域 (LBD)。N 端 A/B 结构域和 LBD 承担åå¼æ¿€æ´»åŠŸèƒ½ï¼Œå¯¹æŽ¥è½¬å½•è¾…助调节å或辅助调节åå¤åˆç‰©è¿›è¡Œé…体ä¾èµ–性转录调节。éšç€è‚¿ç˜¤çš„转å˜ï¼Œå®ƒä»¬äº§ç”Ÿ AR çªå˜ï¼Œå¯¼è‡´å¯¹ç±»å›ºé†‡æ¿€ç´ å’Œåˆæˆé…体的å应改å˜ï¼ŒåŒ…æ‹¬å¯¹é›„æ¿€ç´ æ‹®æŠ—å‰‚çš„æŠ—æ€§ã€‚åœ¨æ¿€ç´ éš¾æ²»æ€§æ‚£è€…çš„å‰åˆ—腺肿瘤ä¸å‘现的大多数点çªå˜å·²åœ¨ AR LBD ä¸å®šä½ã€‚由于 LBD ä¸çš„ç–æ°´å£è¢‹ç‰¹å¼‚性识别和æ•èŽ·é›„æ¿€ç´ å’Œ AR é…ä½“ï¼Œå› æ¤æŽ¨æµ‹ LBD ä¸çªå˜çš„氨基酸残基,特别是构æˆå£è¢‹çš„基åºä¸çš„氨基酸残基会æŸå®³æ¿€ç´ /é…体识别的特异性。事实上,在体外细胞培养ä¸ï¼Œè¿™ç§äººç±» (h)AR 点çªå˜ä½“æ˜¾ç¤ºå‡ºå¯¹å…¶ä»–ç±»å›ºé†‡æ¿€ç´ å’Œé›„æ¿€ç´ æ‹®æŠ—å‰‚çš„èŽ·å¾—æ€§å应。LBD ä¸è‹æ°¨é…¸ 877 点çªå˜ä¸ºä¸™æ°¨é…¸ (T877A) 是å‰åˆ—腺肿瘤ä¸æœ€å¸¸è§çš„çªå˜ä¹‹ä¸€ã€‚值得注æ„çš„æ˜¯ï¼Œåœ¨æ¿€ç´ éš¾æ²»æ€§æ‚£è€…ä¸å‘现的 hAR 点çªå˜ä½“在åå¼æ¿€æ´»æ–¹é¢è¡¨çŽ°å‡ºè¿‡åº¦æ´»è·ƒï¼Œå› 为这些çªå˜ä½“对内æºæ€§éžé›„æ¿€ç´ ç±»å›ºé†‡æ¿€ç´ ä»¥åŠä¸´åºŠä½¿ç”¨çš„ AR åˆæˆæ‹®æŠ—剂过æ•ã€‚除了 AR çªå˜ä½“的异常功能亢进,æ¥è‡ªè‚¿ç˜¤ç»†èƒžå’Œå‘¨å›´éžè‚¿ç˜¤ç»†èƒžçš„细胞信å·ä¹Ÿæœ‰åŠ©äºŽå‰åˆ—腺肿瘤进展。基质和å‰åˆ—è…ºä¸Šçš®åˆ†æ³Œçš„ç”Ÿé•¿å› å与激活的 AR ä¿¡å·ååŒä½œç”¨ï¼Œåœ¨ä½“外刺激å‰åˆ—腺癌细胞生长。然而,在动物模型ä¸ï¼Œè¿™äº›ä½“æ¶²å› å的作用ä»æœ‰å¾…ç ”ç©¶ã€‚å·²ç»å»ºç«‹äº†å‡ ç§å°é¼ å‰åˆ—腺癌模型,并且在表达 T æŠ—åŽŸåŸºå› çš„è½¬åŸºå› é¼ å‰åˆ—腺癌模型 ( TRAMP ) 系之一ä¸è§‚察到自å‘性å‰åˆ—腺肿瘤å‘生。然而,在这ç§å°é¼ 模型ä¸æ— 法é‡çŽ°å‰åˆ—腺肿瘤å‘展和å‘作ä¸çš„é›„æ¿€ç´ ä¾èµ–性。
为了确定异常增强的 AR ä¿¡å·ä¼ 导是å¦åœ¨ä½“内刺激å‰åˆ—腺癌生长,我们通过 Cre-ER T2介导的时空控制é¶å‘体细胞选择性地将æˆå¹´å°é¼ å‰åˆ—腺上皮细胞ä¸çš„ AR T877 çªå˜ä¸º A,从而在å°é¼ ä¸å»ºç«‹äº†ä¸€ä¸ªå®žéªŒæ€§å‰åˆ—腺癌模型。诱å˜ã€‚è¿™ç§ AR 点çªå˜å°é¼ ( AR pe-T877A/Y ) 表现出肥大的å‰åˆ—腺,但未能å‘展出å‰åˆ—腺肿瘤。在切除ç¾ä¸¸çš„ AR çªå˜ä½“ä¸ï¼Œç¾ŸåŸºæ°Ÿä»–胺 (HF),一ç§ä¸´åºŠä½¿ç”¨çš„é›„æ¿€ç´ æ‹®æŠ—å‰‚ï¼Œå¯åˆºæ¿€å‰åˆ—腺生长。通过将 T877A çªå˜å¼•å…¥æˆäººTRAMPçš„å‰åˆ—è…ºä¸Šçš®ç»†èƒžè½¬åŸºå› å°é¼ ,肿瘤形æˆæ—¶é—´ç¼©çŸï¼Œè‚¿ç˜¤ç”Ÿé•¿å—到刺激。在这些å°é¼ ä¸å¯¹è‚¿ç˜¤ç”Ÿé•¿å› åè¿›è¡ŒåŸºå› ç›æŸ¥åŽï¼Œæˆ‘们å‘现了一ç§åŠ 速肿瘤生长的éžç»å…¸ Wnt é…体 (Wnt-5a)。é‡è¦çš„是,增强的 Wnt-5a 表达也å˜åœ¨äºŽå‰åˆ—腺癌患者的肿瘤细胞ä¸ï¼Œä½†ä¸å˜åœ¨äºŽè‰¯æ€§å‰åˆ—腺增生患者的å‰åˆ—腺细胞ä¸ã€‚这些å‘现表明,AR ä¸çš„åŸºå› çªå˜ T877A 通过刺激éžç»å…¸ Wnt ä¿¡å·é€šè·¯ä¿ƒè¿›å‰åˆ—腺肿瘤的生长。
结果将人类 T877A AR çªå˜å¼•å…¥å°é¼ AR åŸºå› ä½ç‚¹ã€‚
为了创建ä½äºŽ AR LBD ä¸çš„æ¡ä»¶çªå˜ä½“ (T877A),我们将包å«AR外显å 6-8 çš„å°é¼ åŸºå› ç»„ DNA 片段替æ¢ä¸ºåŒ…å«ç›¸åº”人类编ç åºåˆ—çš„ DNA 片段,其两侧是三个 loxP ä½ç‚¹ï¼Œç„¶åŽæ˜¯ç¼–ç T877A çªå˜ï¼ˆå›¾1A)。敲入和floxed(L2)å°é¼ 系(AR flox / Y) ,其ä¸Neo盒通过Creä»‹å¯¼çš„èƒšèƒŽå¹²ç»†èƒžåˆ‡é™¤æœ¯è¢«åˆ é™¤ï¼Œæ²¡æœ‰æ˜Žæ˜¾å¼‚å¸¸å¹¶ä¸”æ£å¸¸ç”Ÿé•¿ï¼ˆå›¾1)。 S1 A)。å‰åˆ—腺表型æ£å¸¸ï¼Œæ˜¾ç¤ºå‡ºå¤§é‡å‡ºèŠ½å’Œåˆ†åŒ–为柱状腺上皮。然而,å‰åˆ—腺的大å°åœ¨ 10 周龄时å°äºŽé‡Žç”Ÿåž‹å°é¼ (图 S1 Cå’ŒD)。在 20 å‘¨è¯„ä¼°æ—¶ï¼Œä¸Žå‰ (AP) 和背 (DP) å‰åˆ—腺和精囊 (SV) 相比,腹侧å‰åˆ—è…º (VP) 的生长延迟。AR flox/Y雄性具有生育能力,但其生殖活动å‡å°‘。然而,较å°çš„å‰åˆ—腺在结构上是完整的。由于å‰åˆ—腺的生长ä¾èµ–于 AR ä»‹å¯¼çš„é›„æ¿€ç´ ä¿¡å·ä¼ å¯¼ï¼Œå› æ¤å‰åˆ—腺的表型很å¯èƒ½æ˜¯AR flox/Y是由 AR 蛋白功能å‡é€€å¼•èµ·çš„。AR flox/Y显示AR mRNA æ°´å¹³æ£å¸¸ï¼Œä½† AR 蛋白水平é™ä½Žï¼ˆå›¾ S2 Cå’ŒDï¼‰ã€‚å› æ¤ï¼ŒåŸºå› æ“作å¯èƒ½å½±å“了 AR è›‹ç™½çš„ç¨³å®šæ€§ã€‚ç”±äºŽé›„æ¿€ç´ ç”Ÿç‰©åˆæˆçš„è´Ÿå馈å‡å°‘,血清ç¾é…®æ°´å¹³ä¸Šè°ƒï¼ˆå›¾S1 Bï¼‰ã€‚å› æ¤ï¼Œå°½ç®¡AR flox/Yå°é¼ ä¸çš„é›„æ¿€ç´ ä¿¡å·ä¼ 导似乎å‡å°‘但未显ç€å—æŸï¼Œä½†æˆ‘ä»¬å¾—å‡ºç»“è®ºï¼Œè¿™ç§ floxed å°é¼ 系适åˆè¿›ä¸€æ¥ç ”究。
图。1。
å°† AR T877A çªå˜é€‰æ‹©æ€§å¼•å…¥æˆå¹´å°é¼ çš„å‰åˆ—腺上皮细胞。(一)说明了æ’å…¥AR T877Açªå˜çš„é¶å‘ç–略。该图显示了野生型ARåŸºå› ç»„åŸºå› åº§ã€é¶å‘载体ã€floxed AR T877A L3 å’Œ L2 ç‰ä½åŸºå› ,以åŠåœ¨ Cre 介导的人类外显å 6-8 切除åŽèŽ·å¾—çš„AR T877Aç‰ä½åŸºå› (L-)。B (BamHI)ã€Ev (EcoRV) å’Œ loxP ä½ç‚¹ç”¨ç®å¤´è¡¨ç¤ºã€‚T877A çªå˜ä½ç‚¹ç”¨æ˜Ÿå·è¡¨ç¤ºã€‚( B ) AR pe-T877A/Yå°é¼ ( n = 10) å’ŒAR的腹侧å‰åˆ—è…º (VP) 和总å‰åˆ—è…º (TP)flox/Yå°é¼ ( n = 10) 在 16ã€24 å’Œ 52 周龄时称é‡ã€‚AR pe-T877A/Yå°é¼ 的腹侧å‰åˆ—è…ºå¶æ¯”对照å°é¼ é‡çº¦ 1.5 å€ï¼ˆ* P < 0.05,** P < 0.01,å•å‘方差分æžï¼‰ã€‚å‰éƒ¨å’ŒèƒŒä¾§å‰åˆ—腺显示出相似的结果。误差线代表 SD。( C ) 16 周和 52周龄AR pe-T877A/Yå°é¼ å’ŒAR flox/Yå°é¼ 在暗场解剖显微镜下的å‰åˆ—è…ºå¶ã€‚AR T877Açªå˜ä¿ƒè¿›äº†å‰åˆ—è…ºå¶çš„生长。( D ) 24 周龄ARçš„è‹æœ¨ç²¾å’Œä¼Šçº¢æŸ“色的腹侧å‰åˆ—è…ºpe-T877A/Yå°é¼ å’ŒAR flox/Yå°é¼ 。
å°† T877A AR çªå˜é€‰æ‹©æ€§å¼•å…¥æˆå¹´å°é¼ çš„å‰åˆ—腺上皮细胞。然åŽï¼Œæˆ‘们使用KLKB1-Cre-ER T2å°é¼ 系和 T877A å°é¼ ç³»æ¥ç”Ÿæˆå‰åˆ—腺上皮特异性 T877A 敲入。首先,使用通过Cre介导的切除诱导β-åŠä¹³ç³–è‹·é…¶åŸºå› çš„æµ‹è¯•å°é¼ ç³»è¯å®žäº†Creçš„å‰åˆ—腺特异性切除。Cre 酶活性(Cre-ER T2系统)需è¦æ¿€æ´»é›Œæ¿€ç´ å—体点çªå˜ä½“,该çªå˜ä½“仅对 ERα 部分激动剂他莫昔芬 (TAM) æ•æ„Ÿï¼Œä½†å¯¹å†…æºæ€§é›Œæ¿€ç´ ä¸æ•æ„Ÿã€‚在用 TAM å¤„ç† 5 天åŽï¼Œåœ¨å‰åˆ—è…ºä¸è§‚察到 β-åŠä¹³ç³–苷酶的清晰染色(图 S2 A),但在其他测试组织ä¸æ²¡æœ‰ã€‚然åŽæˆ‘们越过了AR flox/Yå°é¼ 与KLKB1-Cre-ER T2å°é¼ 通过 Cre 介导的 loxP ä½ç‚¹åˆ‡é™¤å°†é‡Žç”Ÿåž‹ hAR LBD 的蛋白质表达替æ¢ä¸ºç‚¹çªå˜ (T877A) hAR LBD (图1A ) , 生æˆKLKB1-Cre-ER T2 ; AR flox/Yé¼ æ ‡çº¿ã€‚ç„¶åŽï¼Œè¿™äº› 16 周龄的å°é¼ 用 TAM å¤„ç† 5 天以产生AR pe-T877A/Yï¼Œå…¶ä¸ AR T877A 在å‰åˆ—腺上皮细胞ä¸é€‰æ‹©æ€§è¡¨è¾¾ã€‚这些å°é¼ 没有表现出明显的异常并且æ£å¸¸ç”Ÿé•¿ã€‚类似于AR flox/Yå°é¼ ,AR pe-T877A/Yå°é¼ 有生育能力,但生殖活动å—æŸã€‚在 20 åªå°é¼ ä¸çš„ 15 åªçš„å‰åˆ—è…ºåŸºå› ç»„åºåˆ—ä¸å¯æ£€æµ‹åˆ° T877A çªå˜ï¼ˆå›¾ S2 B)。AR pe-T877A/Yå‰åˆ—è…ºä¸çš„AR转录物和蛋白质的表达水平与 AR flox/Y çš„è¡¨è¾¾æ°´å¹³æ— æ³•åŒºåˆ†ï¼ˆå›¾ S2 Cå’ŒDï¼‰ã€‚æ ¹æ®è¿™äº›è§‚察,我们得出结论,Cre-ER T2系统æˆåŠŸåœ°åœ¨å°é¼ å‰åˆ—è…ºä¸é€‰æ‹©æ€§å’Œè¯±å¯¼æ€§åœ°è¡¨è¾¾ AR T877A çªå˜ä½“。
AR pe-T877A/Yå°é¼ è¡¨çŽ°å‡ºé›„æ¿€ç´ è¯±å¯¼çš„å‰åˆ—è…ºå‘育,没有å¯æ£€æµ‹åˆ°çš„肿瘤å‘生。
AR pe-T877A/Yå°é¼ çš„å‰åˆ—腺表型与AR flox /Y 没有区别(图1C);然而,与AR flox/Y对照å°é¼ (KLKB1-Cre-ER T2;未用 TAM 处ç†çš„AR flox/Y系)相比,直到 16 周,å‰åˆ—腺生长都得到了增强(图 1B )。在AR pe-T877A/Yå°é¼ ä¸è§‚察到å‰åˆ—腺细胞的过度增殖,æ£å¦‚ç»“åˆ BrdU 的细胞数é‡å¢žåŠ 所è¯æ˜Žçš„é‚£æ ·ï¼Œè€Œæ´»åŒ–çš„ caspase-3(一ç§å‡‹äº¡å› å)的表达没有改å˜ï¼ˆå›¾ S2 E)。AR pe-T877A/Yå°é¼ 在 52 周(图 1Cå’ŒD)或更晚时的组织å¦åˆ†æžæœªæ£€æµ‹åˆ°å‰åˆ—è…ºè‚¿ç˜¤ã€‚å› ä¸ºå†…æºæ€§ç¾é…®æ°´å¹³æ˜¾ç€ä¸Šè°ƒï¼ˆå›¾S1 B),å°é¼ 被阉割。去势的AR pe-T877A/Yå°é¼ çš„å‰åˆ—è…ºå‘育在 24 周龄时严é‡è¿Ÿç¼“。VP(图 2 Aå’ŒB)和总å‰åˆ—腺(TP)(图2A)通过 5α-二氢ç¾é…®ï¼ˆDHT)治疗 3 周æ¢å¤ã€‚è¿™ç§ DHT å应在两个阉割者ä¸éƒ½å¯è§AR flox/Yå’ŒAR pe-T877A/Yå°é¼ 。这些观察结果表明,这些细胞系的å‰åˆ—è…ºå‘育ä¾èµ–于内æºæ€§é›„æ¿€ç´ ã€‚ç„¶è€Œï¼ŒT877A 点çªå˜ä¸è¶³ä»¥å¼•å‘肿瘤å‘生。
图 2。
AR pe-T877A/Yå°é¼ å¯¹æ¿€ç´ å’Œæ‹®æŠ—å‰‚ä¿¡å·çš„异常å‰åˆ—腺生长å应。( A )å°† 24 周龄的AR pe-T877A/Yå°é¼ å’ŒAR flox/Yå°é¼ 分为 8 组(æ¯ç»„n = 5 åªï¼‰å¹¶ç”¨æ¿€ç´ (DHTã€HFã€E2 或 BIC)治疗 3 周阉割或å‡æ‰‹æœ¯åŽã€‚然åŽåˆ‡é™¤å‰åˆ—腺并称é‡ã€‚去势的AR flox/Yå°é¼ çš„å‰åˆ—è…ºå˜æ€§åªèƒ½é€šè¿‡ DHT æ¥é¢„é˜²ï¼›ç„¶è€Œï¼Œæ‰€æœ‰æ¿€ç´ æ²»ç–—å¯¹AR pe-T877A/Yå°é¼ çš„å‰åˆ—腺退化都有ä¿æŠ¤ä½œç”¨ï¼ˆ* P< 0.05,å•å› ç´ æ–¹å·®åˆ†æžï¼‰ã€‚误差线代表 SD。BIC,比å¡é²èƒºï¼›DHT,5α-二氢ç¾é…®ï¼›E2, 17β-雌二醇;HF,​​羟基氟他胺。( B )æ¿€ç´ æ²»ç–—åŽåŽ»åŠ¿AR pe-T877A/Yå°é¼ 的典型腹侧å‰åˆ—腺。(C ï¼‰ç”¨æŒ‡å®šæ¿€ç´ å¤„ç†çš„AR pe-T877A/Yå°é¼ 腹侧å‰åˆ—腺的è‹æœ¨ç²¾å’Œä¼Šçº¢æŸ“色。AR pe-T877A/Yå°é¼ çš„å‰åˆ—è…ºå°ç®¡ç»“构通过用 HF 或 E2 治疗æ¥ç»´æŒã€‚
AR pe-T877A/Yå°é¼ çš„å‰åˆ—腺生长å—åˆ°é›„æ¿€ç´ æ‹®æŠ—å‰‚å’Œé›Œæ¿€ç´ çš„åˆºæ¿€ã€‚
在å‰åˆ—腺癌的åˆå§‹é˜¶æ®µï¼Œè™½ç„¶ç»†èƒžä¿ç•™æ¿€ç´ å应性,但患者会接å—åˆæˆé›„æ¿€ç´ æ‹®æŠ—å‰‚æ²»ç–—ï¼Œä»¥å‡è½»é›„æ¿€ç´ è¯±å¯¼çš„è‚¿ç˜¤å‘展。然而,ç»è¿‡å‡ å¹´çš„æ²»ç–—ï¼Œæ¿€ç´ ä¾èµ–性状æ€ç»å¸¸æ¶ˆå¤±ï¼Œç¼–ç LBDçš„AR外显åä¸å‡ºçŽ°æ–°çš„åŸºå› çªå˜ ã€‚å› æ¤ï¼Œæˆ‘们询问AR pe-T877A/Yå°é¼ 是å¦ä¼šäº§ç”Ÿä¸Žæ¿€ç´ 难治性患者相似的å应。用临床上使用的 AR 拮抗剂 HF 进行 3 周治疗,刺激了AR pe-T877A/Yå°é¼ çš„å‰åˆ—腺生长,但在AR flox/Yå°é¼ ä¸æ²¡æœ‰ã€‚图 2 Aå’ŒB )。åŒæ ·ï¼Œå¤–æºæ€§ 17β-雌二醇 (E2) 的高剂é‡ï¼ˆ160 μg/d,3 周)明显刺激å‰åˆ—腺生长,而å¦ä¸€ç§ AR 拮抗剂比å¡é²èƒº (BICï¼›Casodex) 没有引起刺激作用(图2Cï¼‰ã€‚å› æ¤ï¼Œä¼¼ä¹ŽAR pe-T877A/Yå°é¼ å¯èƒ½é‡çŽ°äº†æ¿€ç´ 难治性å‰åˆ—腺癌患者的异常å应。
å‰åˆ—腺癌实验å°é¼ æ¨¡åž‹ä¸ T877A AR çªå˜è¯±å¯¼çš„åŠ é€Ÿè‚¿ç˜¤å‘生。
å› ä¸ºAR pe-T877A/Yå°é¼ å³ä½¿åœ¨ 1 å¹´åŽä¹Ÿæœªèƒ½å‘展出å¯æ£€æµ‹çš„å‰åˆ—腺肿瘤,我们在已知的实验性å‰åˆ—腺癌模型 ( TRAMP ) ä¸æµ‹è¯•äº† T877A AR çªå˜å¯¹å‰åˆ—腺肿瘤生长的影å“。该å°é¼ 系自å‘å‘展为å‰åˆ—腺癌,其ä¸çš„肿瘤类似于在人类ä¸çœ‹åˆ°çš„肿瘤。TRAMPå°é¼ 与KLKB1-Cre-ER T2æ‚交;AR flox/Yå°é¼ 产生TRAMPï¼›KLKB1-Cre-ER T2ï¼›AR flox/Yé¼ æ ‡çº¿ã€‚åœ¨ 16 周龄时,这些å°é¼ 用 TAM 治疗 5 天,以将 T877A çªå˜å¼•å…¥å‰åˆ—腺。该å°é¼ å“系(TRAMP-AR pe-T877A/Y)比TRAMP-AR flox /Yå°é¼ 表现出更早的å‰åˆ—腺肿瘤生长(图 3Aå’ŒC)。å‰åˆ—腺肿瘤的快速生长导致所有TRAMP-AR pe-T877A/Yå°é¼ 在 36 周龄左å³æ»äº¡ã€‚相å,TRAMP-AR flox/Yå°é¼ å˜æ´»è¶…过 48 周(图 3A ï¼‰ã€‚ä¸€è‡´åœ°ï¼Œå‡ ä¸ªå·²çŸ¥çš„ AR é¶åŸºå› (Probasinã€PSP94ã€Fkbp51ã€Stk37)的表达水平 –æ¥è‡ªTRAMP-AR pe-T877A/Yçš„å‰åˆ—腺肿瘤(图31 )比TRAMP-AR flox/Yçš„å‰åˆ—腺肿瘤更高(图3Dï¼‰ã€‚ç„¶è€Œï¼Œæœªæ£€æµ‹åˆ°è‚¿ç˜¤ç›¸å…³åŸºå› è¡¨è¾¾æ°´å¹³çš„æ˜¾ç€å˜åŒ–(图S3)。组织å¦ä¸Šï¼ŒTRAMP-AR pe-T877A/Y å°é¼ 在 19 周时的å‰åˆ—腺肿瘤表型与TRAMP -AR flox/Yå°é¼ çš„å‰åˆ—è…ºè‚¿ç˜¤è¡¨åž‹æ— æ³•åŒºåˆ†ï¼ˆå›¾3B)。
图 3。
在å‰åˆ—腺癌的实验模型ä¸ï¼Œ AR T877Aå°é¼ çªå˜è¯±å¯¼äº†è‚¿ç˜¤ç”Ÿé•¿çš„早期å‘生。( A ) AR T877Açªå˜å¯¹å‰åˆ—腺肿瘤生长的影å“。TRAMP-AR pe-T877A/Yå°é¼ å’ŒTRAMP-AR flox/Yå°é¼ 分为 11 组(æ¯ç»„n = 5)。从 18 到 50 周龄,æ¯ç»„å°é¼ æ¯ 3 周处æ»ä¸€æ¬¡å¹¶ç§°é‡å‰åˆ—腺。TRAMP-AR pe-T877A/Yå°é¼ 早期å‘展为å‰åˆ—腺肿瘤,肿瘤迅速生长,直到动物在 36 周时æ»äº¡ï¼ˆ** P < 0.01,å•å‘方差分æžï¼‰ã€‚TRAMP-AR flox/Yå°é¼ 在 24 周åŽå‡ºçŽ°å‰åˆ—腺肿瘤,大多数å°é¼ å˜æ´»è¶…过 50 周。黑柱表示TRAMP-AR pe-T877A/Yå°é¼ ,白柱表示TRAMP-AR flox/Yå°é¼ 。NS,没有生å˜ã€‚( B ) TRAMP-AR pe-T877A/Yå’ŒTRAMP-AR flox/Yå°é¼ 19 周龄时è‹æœ¨ç²¾å’Œä¼Šçº¢æŸ“色的å‰åˆ—è…ºå¶ã€‚TRAMP-AR flox/Yå’ŒTRAMP-AR pe-T877A/Yå°é¼ 的腹侧å‰åˆ—腺由缺ä¹æ£å¸¸è…ºä½“å‰åˆ—腺结构的未分化æ¶æ€§ç»†èƒžç‰‡ç»„æˆã€‚( C ) 27周龄 TRAMP-AR的外观pe-T877A/Yå°é¼ å’ŒTRAMP-AR flox/Yå°é¼ 。( D ) TRAMP-AR pe-T877A/Yå°é¼ å’ŒTRAMP-AR flox/Yå°é¼ ä¸ AR é¶åŸºå› çš„å®šé‡ RT-PCR 分æžã€‚与TRAMP-AR flox/Y 相比,TRAMP - AR pe-T877A/Y å‰åˆ—腺肿瘤ä¸åŸºå› 表达水平的比率代表了五个独立实验(** P < 0.01,å¦ç”Ÿt检验)。
为了测试TRAMP-AR pe-T877A/Yä¸å‰åˆ—腺肿瘤的早期å‘病和快速生长是å¦æ˜¯è‚¿ç˜¤è‡ªä¸»å’Œ/æˆ–é›„æ¿€ç´ ä¾èµ–性的,我们将肿瘤移æ¤åˆ°è£¸é¼ çš„å‰åˆ—腺腹å¶ä¸ï¼ˆå›¾ 1)。 S4 A )。å‰åˆ—腺肿瘤继ç»ç”Ÿé•¿ã€‚在移æ¤åŽ 8 周,æ¥è‡ªTRAMP-AR pe-T877A/Yå°é¼ 的肿瘤比æ¥è‡ªTRAMP-AR flox/Yå°é¼ 的肿瘤大三å€ï¼ˆå›¾ S4 B - D)。当这些å°é¼ 被阉割时, TRAMP-AR flox/Yå°é¼ 比TRAMP-AR pe-T877A/ Y å°é¼ çš„è¿™ç§è‚¿ç˜¤ç”Ÿé•¿æ›´å‡å¼±å°é¼ (图 S5 Aå’ŒB),表明肿瘤生长ä¾èµ–于激活的 AR åŠŸèƒ½ã€‚æ ¹æ®è¿™äº›å‘现,我们推测TRAMP-AR pe-T877A/Yå°é¼ 的肿瘤进展å¯å½’å› äºŽå†…æºæ€§æ¿€ç´ 诱导的 AR 功能亢进。æ¤å¤–,我们å‡è®¾åœ¨å‰åˆ—è…ºä¸è¡¨è¾¾çš„æŸäº›å› å增强了æºå¸¦ T877A çªå˜çš„å‰åˆ—腺肿瘤的生长。
éžç»å…¸ Wnt é…体在实验性å‰åˆ—腺癌ä¸å……当激活剂。
æˆ‘ä»¬æŽ¨æ– AR çªå˜ä½“在肿瘤生长ä¸çš„功能通过与å‰åˆ—è…ºç”Ÿé•¿å› åå’Œ/æˆ–ç»†èƒžå› åä¿¡å·é€šè·¯çš„ä¸²æ‰°è€Œå¢žå¼ºã€‚å‡ ä¸ªä¸»è¦çš„å€™é€‰å› å(Fgf10ã€Stat3ã€Tab2ã€Wnt-5a)已被è¯æ˜Žå¯åœ¨ä½“内和体外调节å‰åˆ—腺生长,通过穿越TRAMP进行了检查;KLKB1-Cre-ER T2ï¼›AR flox/Yå°é¼ å“系与缺ä¹å€™é€‰å› åçš„å“ç³» ( 32 – 37 )。然åŽç”¨ TAM 治疗 16 周龄的åŽä»£ä»¥å¼•å…¥ AR T877Açªå˜ã€‚åœ¨æµ‹è¯•çš„å› ç´ ä¸ï¼ŒWnt-5a çš„å•å€ä½“ä¸è¶³ï¼ˆ33) 显ç€ä¸æ¢äº†TRAMP-AR pe-T877A/Yå°é¼ ä¸å‰åˆ—腺肿瘤的早期å‘病和早期致æ»çŽ‡ï¼Œå¹¶èµ‹äºˆäº†ä¸ŽTRAMP-AR flox/Y对照线ä¸è§‚察到的相似的å‰åˆ—腺生长(图 4A ï¼‰ã€‚å› æ¤ï¼ŒWnt-5a 似乎是 AR 介导的å‰åˆ—腺癌生长的激活剂。Wnt-5a 是å‚与éžç»å…¸ Wnt ä¿¡å·é€šè·¯çš„é…体,它还共åŒè°ƒèŠ‚ PPARγ çš„åå¼æ¿€æ´»åŠŸèƒ½ ( 33 )ã€‚åœ¨ç ”ç©¶ä¸Ž AR 功能亢进相关的 Wnt-5a 作用期间,å‘现 LNCaP 细胞内æºæ€§è¡¨è¾¾ Wnt-5a(图 4 B和图 S6)。当 Wnt-5a 被击倒时(图 4 B和图S6 ),é…体ARçš„åå¼æ¿€æ´»åŠŸèƒ½æ˜Žæ˜¾é™ä½Ž(图4C)。一致地,LNCaP ç»†èƒžçš„é›„æ¿€ç´ ä¾èµ–æ€§å¢žæ®–é€šè¿‡è¿™ç§ Wnt-5a 敲低而å‡å¼±ï¼ˆå›¾ 4 D和图 S7)。
图 4。
Wnt-5a 是一ç§éžç»å…¸ Wnt é…体,是具有AR T877Açªå˜çš„å‰åˆ—腺肿瘤的激活剂。( A ) Wnt-5a +/-çš„å‰åˆ—è…ºæƒé‡ï¼›TRAMP-AR pe-T877A/Yå°é¼ å’ŒWnt-5a +/-ï¼›TRAMP-AR flox/Yå°é¼ 。将å°é¼ 分为ä¹ç»„(æ¯ç»„n = 5)。æ¯2周切除æ¯ç»„å°é¼ çš„å‰åˆ—腺并称é‡ã€‚Wnt-5a +/+ ; TRAMP-AR pe-T877A/Y或Wnt-5a +/+ï¼›TRAMP-AR flox/Yå°é¼ 也作为对照进行分æžã€‚请注æ„,å³ä½¿åœ¨ 26 周龄时,Wnt-5a +/-ï¼›TRAMP-AR pe-T877A/Yå°é¼ 未å‘生明显的å‰åˆ—腺肿瘤(* P < 0.05,** P < 0.01,å•å‘方差分æžï¼‰ã€‚( B ) 所示 siRNA 在 LNCaP 细胞ä¸å¯¹äºº Wnt-5a 的效率。在转染 siRNA 48 å°æ—¶åŽï¼Œç”¨ α-Wnt-5a(R&D Systems)或 α-肌动蛋白(Santa Cruz Biotechnology)进行蛋白质å°è¿¹ã€‚(Cå’ŒD)Wnt-5a 敲低对 LNCaP ç»†èƒžä¸ AR ä»‹å¯¼çš„é›„æ¿€ç´ ä¿¡å·ä¼ 导的衰å‡ã€‚转染 siRNA çš„ LNCaP 细胞进行转染以进行报告è§å…‰ç´ 酶测定(C) 或细胞增殖试验 ( D )。AR é…体与细胞一起åµè‚² 12 å°æ—¶ï¼ˆC)或 6 天(D)。æ¯ä¸ªç‚¹ä»£è¡¨ä¸‰ä¸ªç‹¬ç«‹å®žéªŒçš„å¹³å‡å€¼ ± SD(* P < 0.05,** P < 0.01,åŒå‘方差分æžï¼‰ã€‚
人类å‰åˆ—腺肿瘤ä¸çš„异常 Wnt-5a 表达。
为了解决 Wnt-5a 对人类å‰åˆ—腺癌的影å“,我们检测了 Wnt-5a 在人类å‰åˆ—è…ºä¸çš„表达。在良性å‰åˆ—腺增生ä¸ï¼Œé€šè¿‡å…疫组织化å¦åˆ†æžï¼ŒWnt-5a的表达水平是æ£å¸¸çš„(图5B)。相å,与周围æ£å¸¸ç»„织相比,æ¶æ€§å‰åˆ—腺肿瘤(数æ®é›† S1)表现出异常上调的 Wnt-5a 表达(图 5 Aå’ŒB)。基质-ä¸Šçš®ç›¸äº’ä½œç”¨å’Œç”±è¿™äº›ç›¸äº’ä½œç”¨äº§ç”Ÿçš„ç”Ÿç‰©æ´»æ€§å› å已被è¯æ˜Žåœ¨ç™Œç—‡è¿›å±•ä¸å¾ˆé‡è¦ã€‚在这里,我们检查了癌细胞ä¸çš„ Wnt-5a 是以自分泌方å¼è¿˜æ˜¯ä»¥æ—分泌方å¼èµ·ä½œç”¨ã€‚通过å…ç–«è§å…‰åˆ†æžï¼Œåœ¨ç™Œç»†èƒžå’ŒåŸºè´¨ç»†èƒžç±»åž‹ä¸å‡è§‚察到Wnt-5aå’ŒAR蛋白的表达(图5C )。然而,这两ç§å› å的共定ä½è¡¨è¾¾ä¸»è¦åœ¨ç™Œç»†èƒžä¸æ£€æµ‹åˆ°ï¼ˆå›¾5C ï¼‰ã€‚å› æ¤ï¼Œç™Œç»†èƒžä¸çš„ Wnt-5a 效应å¯èƒ½ä¸»è¦ä»¥è‡ªåˆ†æ³Œæ–¹å¼å‘生。这些å‘现表明 Wnt-5a å¯ä»¥ä½œä¸º AR ä»‹å¯¼çš„é›„æ¿€ç´ ä¿¡å·ä¼ 导的激活剂,在人类å‰åˆ—腺的æŸäº›ç—…ç†æ¡ä»¶ä¸‹ä¿ƒè¿›å‰åˆ—腺生长,如在å°é¼ ä¸æ‰€è§ã€‚
图 5。
人å‰åˆ—腺癌ä¸çš„异常 Wnt-5a 表达。( A ) Wnt-5a 表达是通过对诊æ–为良性å‰åˆ—腺增生和å‰åˆ—腺癌患者的å‰åˆ—腺进行å…疫染色æ¥æ£€æµ‹çš„。( B )增生的上皮和间质ä¸Wnt-5a阳性细胞的数é‡ï¼Œå‰åˆ—腺肿瘤æ£å¸¸åŒºåŸŸçš„上皮和间质,å‰åˆ—腺肿瘤ä¸çš„癌细胞和间质(æ•°æ®é›†S1 )。统计了 9 å良性å‰åˆ—腺增生患者和 37 åå‰åˆ—腺癌患者(* P < 0.05,å•å› ç´ æ–¹å·®åˆ†æžï¼‰ã€‚( C) Wnt-5a(绿色)和 AR(红色)的å…ç–«è§å…‰åŒæŸ“色表明 Wnt-5a å’Œ AR 主è¦å…±å®šä½äºŽäººå‰åˆ—腺癌的癌细胞ä¸ã€‚è¿™ç§å…±å®šä½åœ¨å‰åˆ—腺肿瘤的基质细胞ä¸ä¸å˜åœ¨ã€‚从三个独立的实验ä¸æ˜¾ç¤ºäº†æ¥è‡ªè¢«è¯Šæ–患有良性å‰åˆ—腺增生和å‰åˆ—腺癌的患者的å‰åˆ—腺的代表性图åƒã€‚
讨论
å·²ç»å¼€å‘了å‰åˆ—腺癌å°é¼ 模型以æ高对å‰åˆ—腺癌å‘生的分å基础的ç†è§£ï¼Œå¹¶æŽ¢ç´¢å‰åˆ—腺癌患者的治疗方案。一些模型é™åˆ¶æ˜¯å›ºæœ‰çš„ï¼Œå› ä¸ºå‰åˆ—腺结构和肿瘤的主è¦åŒºåŸŸ/细胞在人类患者和å°é¼ 模型ä¸å¹¶ä¸ç›¸åŒã€‚尽管如æ¤ï¼Œå·²é€šè¿‡å°é¼ é—ä¼ æ–¹æ³•æµ‹è¯•äº†è‡´ç™Œå’ŒæŠ—ç™ŒåŸºå› å¯¹å‰åˆ—腺肿瘤的影å“ã€‚åœ¨è¿™äº›å€™é€‰å› ç´ ä¸ï¼ŒAR 是最å—å…³æ³¨çš„ï¼Œå› ä¸ºå®ƒæ¶‰åŠå‰åˆ—è…ºç™Œçš„æ‰€æœ‰é˜¶æ®µã€‚é›„æ¿€ç´ ä½œç”¨å¯¹äºŽå‰åˆ—腺的å‘育和功能是必ä¸å¯å°‘的,并且对肿瘤å‘生有刺激作用,显然是通过 AR å‘挥作用的。æ¤å¤–,å³ä½¿åœ¨è½¬å˜ä¸ºé›„æ¿€ç´ éžä¾èµ–状æ€åŽï¼ŒAR 也被认为是å‰åˆ—è…ºç™Œçš„å…³é”®å› ç´ ã€‚æ— è®º AR åœ¨é›„æ¿€ç´ ä¾èµ–性和éžä¾èµ–性å‰åˆ—腺癌ä¸çš„功能如何,由于 AR 在å‰åˆ—è…ºå‘育ä¸çš„先天作用,评估 AR 功能的å°é¼ 模型一直ä¸å¯ç”¨ã€‚为了é¿å…这个困难,我们引入了一ç§æ”¹è‰¯çš„ Cre-loxP 系统,以选择性地将点çªå˜å¼•å…¥æˆå¹´å°é¼ å‰åˆ—è…ºä¸çš„ AR LBD(AR pe-T877A/Yè€é¼ )。这ç§çªå˜ (T877A) 常è§äºŽé›„æ¿€ç´ éžä¾èµ–性患者的å‰åˆ—腺肿瘤。
å³ä½¿åœ¨ 1 å¹´åŽï¼Œ AR pe-T877/Yå°é¼ çš„å‰åˆ—è…ºä¸ä¹Ÿæ— 法检测到瘤形æˆï¼Œè¿™è¡¨æ˜Žå¯¼è‡´ AR 过度活跃的å•ä¸ªçªå˜ä¸è¶³ä»¥å¼•å‘å‰åˆ—腺肿瘤å‘ç”Ÿã€‚å› æ¤ï¼Œæ£å¦‚文献ä¸å·²ç»é¢„æµ‹çš„é‚£æ ·ï¼Œåœ¨å°é¼ ä¸å‡ºçŽ°åŠŸèƒ½äº¢è¿›çš„ AR å‰åˆ—腺肿瘤似乎需è¦è‡³å°‘一个é¢å¤–çš„å› ç´ ã€‚åœ¨æˆ‘ä»¬æœ€åˆçš„试点实验ä¸ï¼Œæˆ‘们试图比较Pten +/-(由日本ç¦å†ˆä¹å·žå¤§å¦çš„ A. Suzuki æ…·æ…¨æ供)和TRAMPå°é¼ 模型系之间的 T877A çªå˜å¯¹å‰åˆ—腺肿瘤å‘生的影å“,å‘现没有显ç€å·®å¼‚在肿瘤的å‘生和进展ä¸Pten +/- 30 周龄时的é—ä¼ èƒŒæ™¯ã€‚ç›¸æ¯”ä¹‹ä¸‹ï¼Œå°†AR pe-T877/Y系与TRAMP系交å‰å§‹ç»ˆå¢žå¼ºTRAMPå°é¼ 的肿瘤å‘展,更é‡è¦çš„æ˜¯ï¼Œé›„æ¿€ç´ ä¾èµ–性å˜å¾—æ˜Žæ˜¾ã€‚å› æ¤ï¼ŒTRAMP-AR pe-T877/Y系构æˆäº†ä¸€ç§ç‹¬ç‰¹çš„é›„æ¿€ç´ ä¾èµ–性å‰åˆ—腺癌å°é¼ æ¨¡åž‹ï¼Œå°†æœ‰åŠ©äºŽæŽ¢ç´¢ä»Žé›„æ¿€ç´ ä¾èµ–性转å˜ä¸ºéš¾æ²»çŠ¶æ€çš„分å基础。
TRAMP-AR pe-T877A/Yå°é¼ è¯æ˜Žï¼ŒT877A çªå˜æ˜¾ç€ç¼©çŸäº†è‚¿ç˜¤å‘å±•çš„å¼€å§‹æ—¶é—´å¹¶åŠ é€Ÿäº†è‚¿ç˜¤çš„ç”Ÿé•¿ã€‚TRAMP-AR flox/Y系的平å‡å¯¿å‘½å¤§äºŽ 48 周,而TRAMP-AR pe-T877A/Yå°é¼ çš„å¹³å‡å¯¿å‘½å°äºŽ 36 周。TRAMP-AR pe-T877A/Yå°é¼ æ»äºŽå¤§å°ä¸Žå…¶æ€»ä½“é‡ç›¸å½“的肿瘤。æ¤å¤–,æ¥è‡ªTRAMP-AR pe-T877A/Yå°é¼ 的移æ¤å‰åˆ—è…ºè‚¿ç˜¤çš„ç”Ÿé•¿é€Ÿåº¦æ˜¯è£¸é¼ å¯¹ç…§çº¿çš„ä¸‰å€ã€‚这些å‘现表明,å‰åˆ—è…ºå› å增强了驱动å‰åˆ—腺肿瘤进展的 AR 功能亢进的作用。
使用TRAMP-AR pe-T877A/Yå°é¼ 的微阵列分æžå’Œå®šé‡ PCR éªŒè¯ ï¼Œæˆ‘ä»¬è§‚å¯Ÿåˆ°è‚¿ç˜¤åŸºå› å¦‚ TERT å’Œ Cdk2 å’Œè‚¿ç˜¤æŠ‘åˆ¶åŸºå› NKX3.1ã€ATBF1的预期改å˜, å’Œ p21 (图 S3 )。然而,在该分æžä¸ï¼Œæˆ‘ä»¬æ— æ³•ç¡®å®šåœ¨æ¤é˜¶æ®µå¯¼è‡´è‚¿ç˜¤ç”Ÿé•¿çš„æ–°å€™é€‰åŸºå› ã€‚å› æ¤ï¼Œæˆ‘们选择了一ç§é—ä¼ ç›é€‰ç–略,该ç–ç•¥å¯ä»¥è·¨è¶Šç¼ºä¹ç»†èƒžå¢žæ®–调节剂的å°é¼ 。Wnt-5a 被鉴定为TRAMP-AR pe-T877A/Yä¸å‰åˆ—腺肿瘤早å‘和快速生长的激活剂è€é¼ 。我们还å‘现人类å‰åˆ—è…ºè‚¿ç˜¤ä¸ Wnt-5a 的表达异常上调。Wnt-5a 是一ç§å‚与细胞增殖和分化的éžç»å…¸ Wnt é…体,特别是在胚胎å‘育过程ä¸ã€‚
å¯ä»¥æƒ³è±¡ï¼Œå¼‚ä½ Wnt-5a è¡¨è¾¾å¢žå¼ºç™Œç»†èƒžå¢žæ®–ï¼Œå› ä¸ºä¸Žå‰åˆ—腺癌患者的æ£å¸¸ç»„织相比,Wnt-5a 蛋白在肿瘤ä¸å¼‚å¸¸ä¸Šè°ƒã€‚æ ¹æ®è¿™ä¸€è§‚察结果,Wnt-5a 能够在瞬时表达测定ä¸å…±åŒè°ƒèŠ‚ T877A çªå˜çš„ AR çš„åå¼æ¿€æ´»åŠŸèƒ½å¹¶ä¿ƒè¿› LNCaP 细胞的增殖。连åŒåœ¨ç™Œç»†èƒžä¸ Wnt-5a 与 AR 的有é™å…±å®šä½çš„å‘现,Wnt-5a å¯èƒ½é€šè¿‡ç™Œç»†èƒžä¸çš„自分泌方å¼å¢žå¼º AR ä»‹å¯¼çš„é›„æ¿€ç´ ä¿¡å·ä¼ 导,从而促进肿瘤å‘生。也å¯ä»¥å‡è®¾ Wnt-5a è¡¨è¾¾å®žé™…ä¸Šæ˜¯ç”±ä¸Šæ¸¸å› ç´ è¯±å¯¼çš„ï¼Œç‰¹åˆ«æ˜¯åœ¨åˆå§‹é˜¶æ®µå’Œå‘æ¿€ç´ éš¾æ²»çŠ¶æ€çš„转å˜ã€‚è¿™äº›ä¸Šæ¸¸å› ç´ åœ¨å‰åˆ—腺肿瘤进展ä¸å¯èƒ½ç‰¹åˆ«é‡è¦ã€‚在这方é¢ï¼Œ
ææ–™å’Œæ–¹æ³•é¼ æ ‡æ¨¡åž‹çš„ç”Ÿæˆã€‚
从 TT2 胚胎干 (ES) ç»†èƒžåŸºå› ç»„æ–‡åº“ä¸åˆ†ç¦»å‡ºåŸºå› 组AR DNA 片段。通过æ’入具有两个 loxP ä½ç‚¹çš„野生型AR外显å 6-8 的人 cDNA å’ŒAR T877A外显å 6-8 的人 cDNA 以åŠé˜³æ€§ Neo é€‰æ‹©æ€§æ ‡è®° (Neo r ) æ¥åˆ›å»ºé¶å‘载体(图1Aï¼‰ã€‚å°†èƒ¸è‹·æ¿€é…¶åŸºå› (HSV-tk) 盒连接到é¶å‘载体的 5' 端用于阴性选择。é¶å‘ TT2 ES 克隆在使用 Southern 分æžè¿›è¡Œé˜³æ€§-阴性选择åŽè¢«é€‰æ‹©ï¼Œç„¶åŽä¸Žæ¥è‡ª CD-1 å°é¼ çš„å•ä¸ªå…«ç»†èƒžèƒšèƒŽèšé›†ã€‚floxed AR å°é¼ (ARflox/Y ),最åˆåœ¨ C57BL/6 å’Œ CBA é—ä¼ èƒŒæ™¯çš„æ‚交ç§ä¸Šï¼Œç»è¿‡å››ä»£å›žäº¤åˆ° C57BL/6J 背景ä¸ã€‚这些å°é¼ 与在人PSAå¯åŠ¨å控制下表达他莫昔芬ä¾èµ–性 Cre-ER T2é‡ç»„酶的 KLKB1-Cre-ER T2è½¬åŸºå› å°é¼ 交é…,使我们能够选择性地将 AR T877A çªå˜å¼•å…¥å®Œå…¨åˆ†åŒ–çš„å‰åˆ—腺上皮细胞ä¸ã€‚æˆå¹´å°é¼ ( 23åªï¼‰ã€‚如所述对6周龄å°é¼ 进行他莫昔芬给è¯[æ¯æ—¥æ³¨å°„(1mg/d),æŒç»5天]。为了生æˆWnt-5a +/- / TRAMP-AR pe-T877A/Yå°é¼ ,我们首先交é…KLKB1-Cre-ER T2;带有TRAMPè½¬åŸºå› çš„AR flox/Yå°é¼ è€é¼ 。然åŽæˆ‘们将TRAMP-AR pe-T877A/Yå°é¼ 与 Wnt-5a 缺陷æ‚åˆåå°é¼ æ‚交。所有å°é¼ å‡æŒ‰ç…§ä¸œäº¬å¤§å¦åŠ¨ç‰©æŠ¤ç†å’Œä½¿ç”¨å§”员会批准的方案进行饲养。
å‰åˆ—腺形æ€åˆ†æžã€‚
å°†å°é¼ 完全麻醉,å–出腹侧ã€å‰ä¾§å’ŒèƒŒä¾§å‰åˆ—è…ºå¶ï¼Œç§°é‡ï¼Œå¹¶åœ¨æš—视野解剖显微镜下检查。然åŽï¼Œç”¨4%多èšç”²é†›å›ºå®šå‰åˆ—腺组织并包埋在石蜡ä¸ã€‚切片 (8 μm) 用è‹æœ¨ç²¾å’Œä¼Šçº¢æŸ“色用于组织å¦æ£€æŸ¥ã€‚有关å…疫组织化å¦ã€RNA 制备和实时 RT-PCR 的方法,请å‚阅SI æ料和方法。
é˜‰å‰²å’Œæ¿€ç´ æ›¿ä»£ã€‚
对 24 周大的å°é¼ 进行去势或å‡æ‰‹æœ¯ï¼Œä»¥åŠ DHT (160 μg/d)ã€HF (160 μg/d)ã€E2 (160 μg/d) 或 Casodex (BIC) 的缓释颗粒(4.1 μg/d) (Innovative Research) 在颈åŽè‚©èƒ›éª¨åŒºåŸŸçš®ä¸‹æ¤å…¥ã€‚3 周åŽï¼Œåˆ‡é™¤è…¹ä¾§å‰åˆ—腺,称é‡å¹¶æ£€æŸ¥ã€‚
å‰åˆ—腺癌的移æ¤ã€‚
当TRAMP-AR pe-T877A/Yå°é¼ å’ŒTRAMP-AR flox/Yå°é¼ çš„å‰åˆ—腺肿瘤达到约 5,000 mg 时,切除肿瘤并在 10% 体积的生ç†ç›æ°´ä¸åˆ‡ç¢Žã€‚将一定体积(0.05 mLï¼‰çš„åˆ‡ç¢Žç»„ç»‡æ³¨å°„åˆ°è£¸é¼ ï¼ˆBALB/c,Scl-nu/nu)的腹侧å‰åˆ—è…ºå¶ä¸ã€‚移æ¤åŽ8周切除å‰åˆ—腺并称é‡ã€‚
统计分æžã€‚
对于所有图表,数æ®è¡¨ç¤ºä¸ºå¹³å‡å€¼ ± SD。使用å•å‘方差分æžæˆ–åŒå‘方差分æžç¡®å®šç»Ÿè®¡å·®å¼‚,然åŽä½¿ç”¨ Fisher ä¿æŠ¤æœ€å°æ˜¾ç€æ€§å·®å¼‚检验或å¦ç”Ÿt检验进行事åŽæ¯”较。统计显ç€æ€§æ˜¾ç¤ºä¸º * P < 0.05 或 ** P < 0.01。
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