AXL 调节 neuregulin1 表达导致头颈癌ä¸çš„西妥昔å•æŠ—è€è¯
抽象的背景å—体酪氨酸激酶 (RTK) è¡¨çš®ç”Ÿé•¿å› åå—体 (EGFR) 过表达,是头颈癌 (HNC) çš„é‡è¦æ²»ç–—é¶ç‚¹ã€‚西妥昔å•æŠ—是目å‰å”¯ä¸€èŽ·å¾—FDA批准用于治疗HNCçš„EGFRé¶å‘è¯ç‰©ï¼›ç„¶è€Œï¼Œå¯¹è¥¿å¦¥æ˜”å•æŠ—的内在和获得性è€è¯æ˜¯ä¸´åºŠä¸Šçš„一个主è¦é—®é¢˜ã€‚我们实验室之å‰æŠ¥é“过 AXL 通过激活 HER3 导致西妥昔å•æŠ—è€è¯ã€‚åœ¨è¿™é¡¹ç ”ç©¶ä¸ï¼Œæˆ‘ä»¬ç ”ç©¶äº† AXLã€HER3 å’Œ neuregulin1 (NRG1) åŸºå› è¡¨è¾¾ä¹‹é—´çš„è”系,é‡ç‚¹æ˜¯äº†è§£å®ƒä»¬ç›¸äº’ä¾èµ–çš„ä¿¡å·å¦‚何促进 HNC 对西妥昔å•æŠ—çš„è€è¯æ€§ã€‚
方法
进行质粒或 siRNA 转染和基于细胞的测定以测试西妥昔å•æŠ—çš„æ•æ„Ÿæ€§ã€‚定é‡PCRå’Œå…ç–«å°è¿¹åˆ†æžç”¨äºŽåˆ†æžåŸºå› 和蛋白质表达水平。评估了七个 HNC 患者æ¥æºçš„异ç§ç§»æ¤ç‰© (PDX) 的蛋白质表达水平。
结果
我们å‘现 HER3 表达对于没有 AXL 表达的西妥昔å•æŠ—è€è¯æ˜¯å¿…è¦çš„,但还ä¸å¤Ÿã€‚我们的结果表明,将 HER3 é…体 NRG1 æ·»åŠ åˆ°è¥¿å¦¥æ˜”å•æŠ—æ•æ„Ÿçš„ HNC 细胞ä¸ä¼šå¯¼è‡´è¥¿å¦¥æ˜”å•æŠ—è€è¯ã€‚æ¤å¤–,过表达 AXL 的细胞在转录水平上调节 NRG1,从而促进西妥昔å•æŠ—è€è¯ã€‚å…ç–«å°è¿¹åˆ†æžæ˜¾ç¤ºï¼Œä¸Žè¥¿å¦¥æ˜”å•æŠ—æ•æ„Ÿçš„ HNC PDX 相比,NRG1 在西妥昔å•æŠ—è€è¯çš„ HNC PDX ä¸çš„表达相对较高。最åŽï¼ŒNRG1 çš„é—ä¼ æŠ‘åˆ¶ä½¿è¿‡è¡¨è¾¾ AXL 的细胞对西妥昔å•æŠ—é‡æ–°æ•æ„Ÿã€‚
结论
è¿™é¡¹ç ”ç©¶çš„ç»“æžœè¡¨æ˜Žï¼ŒAXL å¯èƒ½é€šè¿‡ NRG1 通过 HER3 å‘出信å·ä»¥ä¿ƒè¿›è¥¿å¦¥æ˜”å•æŠ—è€è¯ï¼Œå¹¶ä¸”é¶å‘ NRG1 å¯èƒ½å¯¹ HNC 治疗方法具有é‡è¦çš„临床æ„义。
åŒè¡Œè¯„审报告背景
头颈部鳞状细胞癌 (HNSCC) 从呼å¸æ¶ˆåŒ–é“çš„é»è†œå†…层å‘展而æ¥ã€‚æ®ä¼°è®¡ï¼Œ2020 年美国将有超过 53,000 例新的 HNSCC 病例和 11,000 例æ»äºŽè¯¥ç–¾ç—…。HNSCC 是一ç§å¤æ‚的异质性疾病,起æºäºŽå£è…”ã€èˆŒã€å’½ã€å–‰å’Œå”¾æ¶²è…ºç‰å¤šä¸ªéƒ¨ä½ã€‚90% 以上起æºäºŽå£å’½è½´çš„肿瘤是鳞状细胞癌。在美国,2009-2015 å¹´å£è…”和咽部的 5 年相对生å˜çŽ‡ä¸º 65%。用于治疗这ç§ç™Œç—‡çš„治疗方案通常包括手术ã€æ”¾ç–—ã€åŒ–ç–—ã€é¶å‘治疗和/或å…疫治疗。
用于治疗 HNC 患者的常è§å…¨èº«æ€§è¯ç‰©æ˜¯å•ä¸€ç–—法或包å«é“‚ç±»ã€ç´«æ‰çƒ·ç±»ã€å…疫检查点抑制剂和西妥昔å•æŠ—çš„è”åˆç–—法。西妥昔å•æŠ—是一ç§é¶å‘è¡¨çš®ç”Ÿé•¿å› åå—体(EGFR)的嵌åˆå•å…‹éš†æŠ—体,于 2006 年获得 FDA 批准用于治疗 HNC。EGFR 是 HER å—体酪氨酸激酶(RTK)家æ—çš„æˆå‘˜ï¼ŒEGFR 的异常表达导致在 HNSCC çš„ç—…å› å¦ä¸å—到强烈关注。西妥昔å•æŠ—是唯一对局部晚期和å¤å‘/转移性 HNC å‡æœ‰æ•ˆçš„è¯ç‰©ã€‚å®ƒé€šè¿‡ä»¥é«˜äº²å’ŒåŠ›ç»“åˆ EGFR 的细胞外结构域ã€é˜»æ–é…体结åˆå’Œåˆºæ¿€å—体内化æ¥å‘挥作用。作为 IgG1 类抗体,它还刺激抗体ä¾èµ–æ€§ç»†èƒžæ¯’æ€§ã€‚å½“æ·»åŠ åˆ°æ”¾ç–—æˆ–åŒ–ç–—æ–¹æ¡ˆä¸æ—¶ï¼Œè¥¿å¦¥æ˜”å•æŠ—é¶å‘ EGFR å¯æ高 HNSCC 患者的总体生å˜çŽ‡ã€‚尽管西妥昔å•æŠ—治疗有临床益处,但患者å¯èƒ½ä¼šå¯¹è¥¿å¦¥æ˜”å•æŠ—产生è€è¯æ€§ ã€‚å› æ¤ï¼Œå¯¹è€è¯æœºåˆ¶çš„ç ”ç©¶å¯ä»¥ä¸ºæ”¹è¿› HNSCC 的治疗ç–ç•¥æ供新的è§è§£ã€‚
RTK AXL 是 TAM å—体家æ—( Tyro ã€AXL ã€MER)的æˆå‘˜ï¼Œå¹¶ä¸”与许多æ¶æ€§è‚¿ç˜¤çš„å‘å±•å’Œè¿›å±•æœ‰å…³ã€‚è¿™äº›ç ”ç©¶è¡¨æ˜Ž AXL 在癌细胞增殖ã€è¿ç§»ã€è¡€ç®¡ç”Ÿæˆå’Œè½¬ç§»ä¸çš„作用。AXL mRNA 表达与 HNSCC çš„ä¸è‰¯ç–¾ç—…结果相关,表明 AXL 在这ç§ç–¾ç—…çš„å‘展和/或进展ä¸å…·æœ‰æŽ¨å®šçš„作用。æ¤å¤–,AXL 蛋白表达水平在 HNSCC è‚¿ç˜¤è¿›å±•æœŸé—´å¢žåŠ ã€‚æˆ‘ä»¬çš„å®žéªŒå®¤å…ˆå‰æŠ¥é“,AXL 表达与 HNSCC 患者较高的病ç†åˆ†çº§ã€è¿œå¤„转移和较çŸçš„æ— å¤å‘生å˜æœŸæ˜¾ç€ç›¸å…³ã€‚è®¸å¤šç ”ç©¶å‘现,AXL 还å¯ä»¥ä»‹å¯¼å¯¹æŠ— EGFR 抑制剂的è€è¯æ€§ï¼Œè¿™è¿›ä¸€æ¥æ示了 AXL 在治疗è€è¯æ€§ä¸çš„作用。
RTK HER3 已被è¯æ˜Žåœ¨åŒ…括 HNSCC 在内的许多癌症类型ä¸ä¸Šè°ƒï¼Œå¹¶ä¸”与侵è¢å’Œè½¬ç§»æœ‰å…³ã€‚也有报é“称,膜性 HER3 表达与 HNSCC ä¸è¾ƒå·®çš„总体å˜æ´»çŽ‡æ˜¾ç€ç›¸å…³ã€‚我们的实验室报é“,在éžå°ç»†èƒžè‚ºç™Œ (NSCLC) å’Œ HNSCC ä¸ï¼Œå¯¹è¥¿å¦¥æ˜”å•æŠ—的获得性è€è¯ä¼´éšç€ HER3 çš„ EGFR ä¾èµ–性激活。我们还å‘现 HER3 çš„åŸºå› æ²‰é»˜èƒ½å¤Ÿä½¿è¥¿å¦¥æ˜”å•æŠ—è€è¯çš„克隆对西妥昔å•æŠ—治疗é‡æ–°æ•æ„Ÿï¼Œè¿™è¡¨æ˜Ž HER3 在驱动è€è¯ä¸å‘æŒ¥ä½œç”¨ã€‚è¿™ä¸€ä½œç”¨ä¹Ÿåœ¨ä¸€é¡¹ç ”ç©¶ä¸å¾—到è¯å®žï¼Œè¯¥ç ”究表明抑制 HER3 与西妥昔å•æŠ—è”åˆåœ¨è¥¿å¦¥æ˜”å•æŠ—è€è¯ HNSCC 患者è¡ç”Ÿçš„异ç§ç§»æ¤ç‰©ä¸å…·æœ‰å¾ˆå¼ºçš„æŠ—è‚¿ç˜¤æ´»æ€§ã€‚æ‰€æœ‰è¿™äº›ç ”ç©¶éƒ½å¼ºè°ƒäº† HER3 在治疗抵抗ä¸çš„é‡è¦ä½œç”¨ã€‚总的æ¥è¯´ï¼ŒAXL 或 HER3 å¯ä»¥åœ¨ä»‹å¯¼å¯¹è¥¿å¦¥æ˜”å•æŠ—çš„è€è¯ä¸å‘挥é‡è¦ä½œç”¨ï¼Œå¹¶ä¸” AXL 或 HER3 çš„é¶å‘å¯ä»¥ä½¿è¥¿å¦¥æ˜”å•æŠ—治疗é‡æ–°æ•æ„Ÿã€‚
基于我们之å‰åœ¨è¥¿å¦¥æ˜”å•æŠ—è€è¯èƒŒæ™¯ä¸‹å¯¹ AXL å’Œ HER3 çš„ç ”ç©¶ï¼Œæˆ‘ä»¬ç ”ç©¶äº†è¿™ä¸¤ç§å—体之间的è”系,é‡ç‚¹æ˜¯äº†è§£å®ƒä»¬ç›¸äº’ä¾èµ–çš„ä¿¡å·ä¼ 导以促进对西妥昔å•æŠ—çš„è€è¯æ€§ã€‚AXL 过表达模型显示 AXL 通过激活 HER3 导致西妥昔å•æŠ—è€è¯ï¼Œä½†æˆ‘们å‘现 HER3 çš„é—ä¼ è¿‡è¡¨è¾¾ä¸è¶³ä»¥å¯¼è‡´è¥¿å¦¥æ˜”å•æŠ—è€è¯ã€‚然而,HER3 é…体 neuregulin1 (NRG1) 的外æºæ€§è¡¨è¾¾ç¡®å®žä¼šå¯¼è‡´è¥¿å¦¥æ˜”å•æŠ—è€è¯ã€‚进一æ¥çš„实验表明,AXL å¯ä»¥åœ¨ mRNA 水平调节 NRG1,以促进西妥昔å•æŠ—è€è¯ã€‚其他西妥昔å•æŠ—è€è¯æ¨¡åž‹çš„ AXL å’Œ NRG1 表达相对较高,在这些模型ä¸é¶å‘ NRG1 足以克æœè¥¿å¦¥æ˜”å•æŠ—è€è¯æ€§ã€‚集体,
æ料和方法
试剂
西妥昔å•æŠ—(IMC-C225,Erbitux)è´è‡ªå¨æ–¯åº·æ˜Ÿå¤§å¦è¯æˆ¿ã€‚Gas6 å’Œ NRG1 获自 R&D systems (Minneapolis, MN)。DMSO (MilliporeSigma, St. Louis, MO) 用作体外载体对照。人 IgG (MilliporeSigma, St. Louis, MO) 是西妥昔å•æŠ—的对照。
细胞系和 HNSCC PDX
UMSCC1ã€UMSCC6 å’Œ HNSCC PDX 是从 SPORE 资æºä¸èŽ·å¾—的。HN30 å’Œ PCI37A 细胞系分别是æ¥è‡ªåŠ 利ç¦å°¼äºšå·žæœé˜¿å°”特市希望之城的 Ravi Salgia åšå£«å’ŒåŠ 利ç¦å°¼äºšå·žåŠ 州大å¦æ—§é‡‘å±±åˆ†æ ¡çš„ Jennifer Grandis åšå£«çš„礼物。所有细胞系å‡åœ¨å«æœ‰ 4.5 g/dL è‘¡è„ç³–ã€10% FBSã€é’éœ‰ç´ ï¼ˆ100 å•ä½/mLï¼‰å’Œé“¾éœ‰ç´ ï¼ˆ100 mg/mL)的 DMEM ä¸åŸ¹å…»ã€‚å¨æ–¯åº·æ˜Ÿå¤§å¦éº¦è¿ªé€Šåˆ†æ ¡çš„ TRIP 实验室使用çŸä¸²è”é‡å¤åˆ†æžå’Œå…¬å¼€å¯ç”¨çš„æ•°æ®åº“确认了细胞系的身份。PCI37A çš„ STR å‚考未公开æä¾›ï¼Œä½†åŸºå› ç»„å®Œæ•´æ€§ä¿æŒç›¸ä¼¼è¶…过 2 年。支原体检测是通过å¨æ–¯åº·æ˜Ÿå¤§å¦éº¦è¿ªé€Šåˆ†æ ¡çš„ WiCell æ ¸å¿ƒæœåŠ¡å®Œæˆçš„。补充æ料和方法ä¸åˆ—出了有关细胞系和 PDX 的详细信æ¯ã€‚
质粒和转染
如å‰æ‰€è¿°åˆ¶å¤‡å’Œé€‰æ‹©è´¨ç²’ã€‚æ ¹æ®åˆ¶é€ 商的说明 ,使用 Lipofectamine3000 å’Œ Opti-MEM (Life Technology, Carlsbad, CA) 进行转染。在维æŒç»†èƒžæ—¶ï¼Œä½¿ç”¨æ€ç¨»ç˜ŸèŒç´ (3ug/mL) ä½œä¸ºé€‰æ‹©æ€§æŠ—ç”Ÿç´ ã€‚
siRNA转染
éžé¶å‘å¯¹ç…§æ± siRNA (Cat#D-001810)ã€SMARTpool siRNA é¶å‘ HER3 (Cat#L-003127)ã€AXL (Cat#L-003104) å’Œ NRG1 (Cat#L-004608) è´è‡ª Dharmacon, Inc ( Lafayette, CO) 用于转染 Lipofectamine RNAiMAX (Life Technologies)。å…ç–«å°è¿¹è¯å®žæˆåŠŸæ•²ä½Žã€‚
基于细胞的测定
细胞计数试剂盒 8(CCK8,Dojindo Molecular Technologies,MD)和结晶紫测定用于确定细胞增殖或细胞活力,如å‰æ‰€è¿°ã€‚对于 CCK8 测定,将相åŒæ•°é‡çš„细胞铺在 96 å”æ¿ä¸Šã€‚处ç†åŽï¼Œæ ¹æ®åˆ¶é€ 商的说明进行 CCK8 分æžã€‚对于结晶紫测定,将相åŒæ•°é‡çš„细胞接ç§åœ¨ 6 å”æ¿ä¸ã€‚处ç†åŽï¼Œç»†èƒžç”¨0.5%结晶紫染色。将æ¿é£Žå¹²ï¼Œç”¨ 0.1 M æŸ æª¬é…¸é’ (pH 4.2) 和乙醇 (1:1) 洗脱染料。将洗脱液转移到 96 å”æ¿ä¸ï¼Œåœ¨ 540 nm 处读å–å¸å…‰åº¦ä»¥ç¡®å®šç»†èƒžå¢žæ®–情况。对于使用 siRNA 和其他试剂è”åˆå¤„ç†çš„ç ”ç©¶ï¼Œé¦–å…ˆç”¨ siRNA 转染细胞。24 å°æ—¶åŽï¼Œç»†èƒžç”¨å…¶ä»–试剂å†å¤„ç† 72 å°æ—¶ã€‚所有处ç†ä¸€å¼ä¸¤ä»½æˆ–一å¼ä¸‰ä»½è¿›è¡Œã€‚
å…ç–«å°è¿¹åˆ†æž
使用 RIPA 缓冲液(50 mM Hepesã€pH 7.4ã€150 mM NaClã€0.1% Tween-20ã€10% 甘油ã€2.5 mM EGTAã€1 mM EDTAã€1 mM DTTã€1 mM Na3VO4ã€1 mM PMSFã€1 mM β-ç”˜æ²¹ç£·é…¸ç› (BGP) å’Œ 10 μg/ml äº®è‚½ç´ å’ŒæŠ‘è‚½é…¶ï¼‰ã€‚å¦‚å‰æ‰€è¿°è¿›è¡Œå…ç–«å°è¿¹åˆ†æžã€‚æ ¹æ®åˆ¶é€ 商的说明使用抗体:AXL (Cell Signaling Technologies, MA (CST) #8661)ã€pAXL/pMerTK/pTyro3 (CST #44463)ã€HER3 (CST #12708)ã€pHER3 Y1197 (CST #4561)ã€AKT (CST #2920)ã€pAKT (CST #4060)ã€NRG1 (CST #2573)ã€GAPDH (CST #2118)ã€Î±-微管蛋白 (MilliporeSigma #CP06)。
RNA分离ã€cDNAåˆæˆå’ŒqPCR
如å‰æ‰€è¿°è¿›è¡Œ RNA 分离ã€cDNA åˆæˆå’Œ qPCR。简而言之,使用RNeasy试剂盒(Qiagen)从细胞ä¸åˆ†ç¦»æ€»RNA。然åŽé€šè¿‡ NanoDrop 分光光度计(Thermo Fisher Scientific,Waltham,MA)对 RNA 进行定é‡ã€‚使用 qScriptâ„¢ cDNA SuperMix (Quantabio, Beverly, MA) å°† RNA 逆转录为 cDNA。使用 Bio-Rad CFX96 实时 PCR 系统 (Bio-Rad, Hercules, CA) 进行定é‡å®žæ—¶ qPCRã€‚çœŸæ ¸ 18S rRNA(4,333,760,Life Technologies)和人类 ACTB(4,333,762,Life Technologiesï¼‰ç”¨ä½œæ ‡å‡†åŒ–å¯¹ç…§ã€‚ä½¿ç”¨Î”Î”C t方法分æžåŸºå› 表达水平。
统计分æž
使用 Prism (GraphPad Software, Inc.) 进行统计分æžã€‚使用带有 Bonferroni 事åŽæ£€éªŒçš„é‡å¤æµ‹é‡ ANOVA 评估多组之间的差异。当P  < 0.05时,差异被认为是显ç€çš„。
结果
AXL 导致西妥昔å•æŠ—è€è¯å’Œ HER3 活性增åŠ
以å‰ï¼Œæˆ‘们报é“了许多西妥昔å•æŠ—è€è¯çš„ HNSCC 细胞系相对于西妥昔å•æŠ—æ•æ„Ÿç»†èƒžç³»è¡¨çŽ°å‡º AXL çš„è¡¨è¾¾å’Œæ´»åŒ–å¢žåŠ ã€‚æ¤å¤–,我们通过使用å°å¹²æ‰° RNA (siRNA) 分æžè¡¨æ˜Žï¼Œè¡¨è¾¾ AXL çš„ HNSCC 细胞系ä¾èµ–于该å—体进行增殖。由于 siAXL æŸå®³äº†è¥¿å¦¥æ˜”å•æŠ—抗性 HNSCC 细胞的增殖,我们首先试图确定é…体诱导的 AXL 激活是å¦å¯èƒ½ä»‹å¯¼è¥¿å¦¥æ˜”å•æŠ—抗性。我们用 Gas6ï¼ˆä¸€ç§ AXL é…体)刺激对西妥昔å•æŠ—æ•æ„Ÿçš„ HN30 细胞,以确定这是å¦ä¼šå¯¼è‡´å¯¹è¥¿å¦¥æ˜”å•æŠ—çš„è€è¯æ€§å¢žåŠ 。Gas6 在 HN30 细胞ä¸å¯¹ AXL 的刺激确实导致了对西妥昔å•æŠ—治疗的抗性(图 1 )一ç§ï¼‰ã€‚å…ç–«å°è¿¹åˆ†æžè¡¨æ˜Žï¼Œå³ä½¿åœ¨å˜åœ¨è¥¿å¦¥æ˜”å•æŠ—的情况下,用 Gas6 刺激的 HN30 细胞也具有强烈的 AXL å’Œ HER3 å—体表达和磷酸化。AKT 也被 Gas6 刺激高度磷酸化。这一结果表明 Gas6 对 AXL å’Œ HER3 的激活å¯ä»¥åˆºæ¿€ç»†èƒžå¢žæ®–å’Œå˜æ´»é€”径,从而逃é¿è¥¿å¦¥æ˜”å•æŠ—的抑制作用。
图。1
AXL 导致西妥昔å•æŠ—è€è¯å’Œ HER3 æ´»æ€§å¢žåŠ ã€‚A:HN30 细胞用 100 nM IgGã€100 nM 西妥昔å•æŠ— (Ctx) 或 Ctx å’Œ Gas6 çš„ç»„åˆ (200 ng/uL) å¤„ç† 72 å°æ—¶ï¼Œé€šè¿‡ç»“晶紫测定确定细胞活力。平å‡å€¼ã€SE 和统计分æžä»£è¡¨ä¸¤ä¸ªç‹¬ç«‹å®žéªŒã€‚N  = 3,** P  < 0.01。收获全细胞裂解物并通过 SDS-PAGE 分级分离,然åŽå¯¹æ‰€ç¤ºè›‹ç™½è´¨è¿›è¡Œå…ç–«å°è¿¹ã€‚GAPDH ç”¨ä½œä¸Šæ ·å¯¹ç…§ã€‚B:在用西妥昔å•æŠ—å¤„ç† 72 å°æ—¶åŽï¼Œé€šè¿‡ç»“æ™¶ç´«æµ‹å®šæ³•æµ‹é‡ AXL 过表达细胞ä¸çš„细胞活力。平å‡å€¼ã€SE 和统计分æžä»£è¡¨ä¸‰ä¸ªç‹¬ç«‹å®žéªŒã€‚N  = 3, ** P < 0.01。收获全细胞裂解物并通过 SDS-PAGE 分级分离,然åŽå¯¹æ‰€ç¤ºè›‹ç™½è´¨è¿›è¡Œå…ç–«å°è¿¹ã€‚α-微管蛋白和 GAPDH ç”¨ä½œä¸Šæ ·å¯¹ç…§
为了进一æ¥è¯„ä¼° AXL 的过表达是å¦ä¼šå¢žåŠ HNSCC 细胞ä¸çš„ HER3 磷酸化,我们通过稳定转染在西妥昔å•æŠ—æ•æ„Ÿç»†èƒžç³» HN30 (HN30-AXL) å’Œ PCI37A (PCI37A-AXL) ä¸è¿‡è¡¨è¾¾ AXL。通过å…ç–«å°è¿¹è¯„ä¼° HN30 å’Œ PCI37A ç»†èƒžç³»ä¸ AXL å’Œ HER3 的内æºæ€§æ°´å¹³ï¼ˆè¡¥å……图1)。增殖试验表明,与载体细胞相比,过表达 AXL çš„ç»†èƒžç³»å¯¹å¢žåŠ å‰‚é‡çš„西妥昔å•æŠ—具有显ç€æŠ—性(图 1 )乙)。å…ç–«å°è¿¹åˆ†æžè¯å®žç»†èƒžä¸æ€» AXL è¡¨è¾¾å¢žåŠ ï¼Œä¹Ÿè¡¨æ˜Ž HN30-AXL å’Œ PCI37A-AXL ç»†èƒžä¸ HER3 çš„ç£·é…¸åŒ–å¢žåŠ ã€‚æ€»çš„æ¥è¯´ï¼Œè¿™äº›ç»“果表明 AXL 的过表达导致西妥昔å•æŠ—è€è¯å’Œ HER3 æ´»æ€§å¢žåŠ ã€‚
HER3 是 AXL 介导西妥昔å•æŠ—è€è¯æ‰€å¿…需的
为了确定 HER3 在其抗性由 AXL 过表达引起的西妥昔å•æŠ—抗性细胞ä¸æ˜¯å¦é‡è¦ï¼Œä½¿ç”¨è¥¿å¦¥æ˜”å•æŠ—处ç†å’Œé¶å‘ HER3 çš„ siRNA 进行细胞增殖测定(图 2A)。HN30-AXLã€PCI37A-AXLC1 å’Œ PCI37A-AXLC2 细胞的细胞增殖在使用 siHER3 和西妥昔å•æŠ—的组åˆæ²»ç–—时与å•ç‹¬ä½¿ç”¨ä»»ä¸€æ²»ç–—相比å—到显ç€æŠ‘制。å…ç–«å°è¿¹åˆ†æžæ˜¾ç¤ºï¼ŒsiHER3 和西妥昔å•æŠ—è”åˆæ²»ç–—é™ä½Žäº† AKT 的磷酸化。
图 2
HER3 是 AXL 介导西妥昔å•æŠ—è€è¯æ‰€å¿…需的。将 HN30-AXL å’Œ PCI37A-AXL 细胞铺æ¿å¹¶ç”¨ 30 nM HER3 siRNA (siHER3) 或 30 nM éžé¶ siRNA (siNT) 处ç†ã€‚第二天,用 100 nM IgG 或 100 nM 西妥昔å•æŠ— (Ctx) 处ç†ç»†èƒž 72 å°æ—¶ã€‚在è¯ç‰©å¤„ç†åŽé€šè¿‡CCK8测定测é‡ç»†èƒžå¢žæ®–。平å‡å€¼ã€SE 和统计分æžä»£è¡¨ä¸‰ä¸ªç‹¬ç«‹å®žéªŒã€‚N  = 5–10,** P  < 0.01。处ç†åŽ 24 å°æ—¶æ”¶é›†å…¨ç»†èƒžè£‚解物,通过 SDS-PAGE 分级分离并针对指定的蛋白质进行å…ç–«å°è¿¹ã€‚GAPDH ç”¨ä½œä¸Šæ ·å¯¹ç…§ã€‚ä¹™ å°† UMSCC1 å’Œ UMSCC6 HNSCC 细胞铺æ¿å¹¶ç”¨ 30 nM siAXL 或 30 nM siNT 处ç†ã€‚第二天,用 100 nM IgG 或 100 nM Ctx 处ç†ç»†èƒž 72 å°æ—¶ã€‚在è¯ç‰©å¤„ç†åŽé€šè¿‡ç»“晶紫测定测é‡ç»†èƒžæ´»åŠ›ã€‚å¹³å‡å€¼ã€SE 和统计分æžä»£è¡¨ä¸‰ä¸ªç‹¬ç«‹å®žéªŒã€‚N  = 3,** P  < 0.01。在处ç†åŽ 24 å°æ—¶æ”¶é›†å…¨ç»†èƒžè£‚解物,通过 SDS-PAGE 分级分离,并对所示蛋白质进行å…ç–«å°è¿¹ã€‚GAPDH ç”¨ä½œä¸Šæ ·å¯¹ç…§
å› ä¸º siHER3 抑制 HN30-AXL å’Œ PCI37A-AXL 细胞的增殖,我们接下æ¥ç ”究了在对西妥昔å•æŠ—(UMSCC6ã€UMSCC1)具有内在抗性的细胞系ä¸é¶å‘ AXL 是å¦ä¼šå¢žå¼ºè¥¿å¦¥æ˜”å•æŠ—çš„æ•æ„Ÿæ€§å¹¶é™ä½Ž HER3 的磷酸化。在用 sinontarget (siNT)ã€è¥¿å¦¥æ˜”å•æŠ—ã€siAXL 或 siAXL 和西妥昔å•æŠ—的组åˆå¤„ç† UMSCC6 å’Œ UMSCC1 HNSCC 细胞åŽè¿›è¡Œç»†èƒžå¢žæ®–分æžã€‚这些实验的结果表明,与å•ç‹¬çš„任一治疗相比,siAXL 和西妥昔å•æŠ—的组åˆå¯¹è¿™äº›ç»†èƒžå…·æœ‰æ˜¾ç€çš„抗增殖作用(图 2 )乙)。å…ç–«å°è¿¹åˆ†æžè¡¨æ˜Žï¼Œè”åˆæ²»ç–—抑制了 HER3 的磷酸化。这些结果表明 HER3 ä¿¡å·ä¼ 导与 AXL ååŒè°ƒèŠ‚细胞增殖和对西妥昔å•æŠ—çš„å应。为了进一æ¥ç ”究å•ç‹¬HER3的表达是å¦è¶³ä»¥ä»‹å¯¼å¯¹è¥¿å¦¥æ˜”å•æŠ—çš„è€è¯æ€§ï¼Œå¯¹ä¸¤ç§å¯¹è¥¿å¦¥æ˜”å•æŠ—æ•æ„Ÿä¸”表达很少或ä¸è¡¨è¾¾å†…æºæ€§HER3çš„HNSCC细胞系被æ“纵以过表达HER3并用西妥昔å•æŠ—处ç†ä»¥è¿›è¡Œç»†èƒžå¢žæ®–分æžï¼ˆå›¾ 3 ))。该实验的结果表明,å³ä½¿ HER3 过表达,HN30 å’Œ PCI37A 细胞ä»ç„¶å¯¹è¥¿å¦¥æ˜”å•æŠ—治疗æ•æ„Ÿã€‚AXL 磷酸化水平在 HN30-HER3 å’Œ PCI37A-HER3 细胞ä¸æ²¡æœ‰å¢žåŠ 。总的æ¥è¯´ï¼Œè¿™äº›ç»“果表明没有 AXL 激活的 HER3 过表达ä¸è¶³ä»¥äº§ç”Ÿè¥¿å¦¥æ˜”å•æŠ—è€è¯ã€‚
图 3
ä»… HER3 过表达ä¸è¶³ä»¥äº§ç”Ÿè¥¿å¦¥æ˜”å•æŠ—è€è¯ã€‚ç”:在对 HN30 细胞进行结晶紫测定和对 PCI37A 细胞进行 CCK8 测定之å‰ï¼Œç”¨ 100 nM 西妥昔å•æŠ— (Ctx) 处ç†ç¨³å®šè¿‡è¡¨è¾¾ HER3 或 pcDNA6.0 载体的 HN30 å’Œ PCI37A 细胞 72 å°æ—¶ã€‚在处ç†åŽ 24 å°æ—¶æ”¶èŽ·å…¨ç»†èƒžè£‚解物,并在通过 SDS-PAGE 分级分离åŽè¿›è¡Œå…ç–«å°è¿¹åˆ†æžã€‚GAPDH 或α-å¾®ç®¡è›‹ç™½ç”¨ä½œä¸Šæ ·å¯¹ç…§ã€‚å¹³å‡å€¼ã€SEs 和统计分æžä»£è¡¨ä¸¤ä¸ªæˆ–三个独立实验。N  = 3–6。NS:ä¸æ˜¾ç€
NRG1的外æºè¡¨è¾¾å¯¼è‡´è¥¿å¦¥æ˜”å•æŠ—è€è¯
我们之å‰æ›¾æŠ¥é“过é…体介导的 HER 家æ—å—体激活,尤其是 HER3,å¯ä»¥ä»‹å¯¼å¯¹è¥¿å¦¥æ˜”å•æŠ—çš„è€è¯æ€§ [ 31 , 39 ]ã€‚ç„¶è€Œï¼Œåœ¨è¿™é¡¹ç ”ç©¶ä¸ï¼ŒHER3 表达是必è¦çš„,但对于没有 AXL 表达的西妥昔å•æŠ—è€è¯æ˜¯ä¸å¤Ÿçš„ã€‚å› æ¤ï¼Œæˆ‘们å‡è®¾ AXL 下游的å¦ä¸€ä¸ªé€”å¾„å¿…é¡»å½±å“ HER3 å’Œ HER3 é…体 NRG1 的表达。为了验è¯è¿™ä¸€å‡è®¾ï¼Œæˆ‘们首先用 NRG1 刺激 HN30 å’Œ PCI37A 细胞,以评估这是å¦ä¼šå¯¼è‡´å¯¹è¥¿å¦¥æ˜”å•æŠ—çš„è€è¯æ€§å¢žåŠ 。将 NRG1 æ·»åŠ åˆ° HN30 或 PCI37A 细胞确实会导致对西妥昔å•æŠ—çš„è€è¯æ€§ï¼ˆå›¾ 4一ç§ï¼‰ã€‚å…ç–«å°è¿¹åˆ†æžè¡¨æ˜Žï¼Œåœ¨ NRG1 刺激åŽï¼Œä¸¤ç§ç»†èƒžç³»ä¸ HER3 å’Œ AKT 的磷酸化水平å‡å¢žåŠ ,并且在 NRG1 å˜åœ¨ä¸‹ä¸å—西妥昔å•æŠ—的抑制。这一结果表明,NRG1 çš„å˜åœ¨è¶³ä»¥åˆºæ¿€ HER3,从而调节细胞增殖和å˜æ´»é€”径,从而绕过西妥昔å•æŠ—的抑制作用。
图 4
NRG1 的外æºæ€§è¡¨è¾¾å¯¼è‡´è¥¿å¦¥æ˜”å•æŠ—è€è¯ã€‚å°† HN30 å’Œ PCI37A 细胞铺æ¿å¹¶ç”¨ 100 nM 西妥昔å•æŠ— (Ctx)ã€100 ng/mL NRG1 或 Ctx å’Œ NRG1 的组åˆå¤„ç† 72 å°æ—¶ã€‚通过CCK8测定确定细胞增殖。平å‡å€¼ã€SE 和统计分æžä»£è¡¨ä¸¤ä¸ªç‹¬ç«‹å®žéªŒã€‚N  = 6,** P  < 0.01。在处ç†åŽ 24 å°æ—¶æ”¶èŽ·å…¨ç»†èƒžè£‚解物并通过 SDS-PAGE 分级分离,然åŽå¯¹æ‰€ç¤ºè›‹ç™½è´¨è¿›è¡Œå…ç–«å°è¿¹ã€‚GAPDH ç”¨ä½œä¸Šæ ·å¯¹ç…§ã€‚ä¹™ HN30 å’Œ PCI37A 细胞用 30 nM siHER3 或 30 nM siNT 转染 24 å°æ—¶ï¼Œç„¶åŽç”¨ Ctx (100 nM) 或 NRG1 (100 ng/ml) å†å¤„ç† 72 å°æ—¶ã€‚细胞活力或细胞增殖通过结晶紫测定法测定 HN30 细胞和 CCK8 测定法测定 PCI37A 细胞。平å‡å€¼ã€SEs 和统计分æžä»£è¡¨ä¸¤ä¸ªæˆ–三个独立实验。N  = 3–10,** P  < 0.01。在处ç†åŽ 24 å°æ—¶æ”¶èŽ·å…¨ç»†èƒžè£‚解物,并在通过 SDS-PAGE 分级分离åŽè¿›è¡Œå…ç–«å°è¿¹åˆ†æžã€‚GAPDH ç”¨ä½œä¸Šæ ·å¯¹ç…§
为了确定 HER3 激活在西妥昔å•æŠ—è€è¯ä¸çš„é‡è¦æ€§ï¼Œæˆ‘们用 siHER3 和西妥昔å•æŠ—处ç†è¥¿å¦¥æ˜”å•æŠ—æ•æ„Ÿç»†èƒžç³» HN30 å’Œ PCI37A 72 å°æ—¶ï¼Œç„¶åŽç”¨å¤–æº NRG1 刺激它们。细胞增殖分æžè¡¨æ˜Žï¼ŒHN30 å’Œ PCI37A 细胞在 HER3 敲低和 NRG1 刺激åŽå¯¹è¥¿å¦¥æ˜”å•æŠ—æ•æ„Ÿï¼ˆå›¾ 4B)。这一结果进一æ¥è¯å®žäº† HER3 激活是西妥昔å•æŠ—è€è¯æ‰€å¿…需的。
基于这些结果,我们接下æ¥è¯„估了 AXL 是å¦åˆºæ¿€ NRG1 调节西妥昔å•æŠ—抗性细胞系ä¸çš„ç»†èƒžå¢žæ®–ã€‚å®šé‡ PCR (qPCR) å’Œå…ç–«å°è¿¹åˆ†æžç”¨äºŽåˆ†æž HN30-AXL 或 PCI37A-AXL 细胞ä¸çš„ NRG1 表达水平,分别与 HN30-载体或 PCI37A-载体对照相比(图 5A,补充图2)。在 HN30-AXL å’Œ PCI37A-AXL 细胞ä¸ï¼ŒNRG1 的丰度在 mRNA å’Œè›‹ç™½è´¨æ°´å¹³ä¸Šéƒ½æœ‰æ‰€å¢žåŠ ã€‚
图 5
AXL 调节 NRG1。A 通过qPCRå’Œå…ç–«å°è¿¹åˆ†æžç¡®å®šNRG1在HN30-Vectorã€HN30-AXL PCI37A-Vectorå’ŒPCI37A-AXL细胞ä¸çš„表达水平。α-å¾®ç®¡è›‹ç™½ç”¨ä½œä¸Šæ ·å¯¹ç…§ã€‚å¹³å‡å€¼ã€SE 和统计分æžä»£è¡¨ä¸‰ä¸ªç‹¬ç«‹å®žéªŒã€‚N  = 2-4。B 从 HNSCC PDX 肿瘤ä¸æ”¶é›†å…¨ç»†èƒžè£‚解物,并通过 SDS-PAGE 进行分级分离,然åŽå¯¹æŒ‡å®šçš„蛋白质进行å…ç–«å°è¿¹ã€‚GAPDH ç”¨ä½œä¸Šæ ·å¯¹ç…§ã€‚å…‰å¯†åº¦å€¼ä»£è¡¨æ¥è‡ªä¸¤ä¸ªç‹¬ç«‹å®žéªŒçš„ NRG1/GAPDH çš„å¹³å‡æ¯”率。误差线:SEM(* P < 0.05,Mann-Whitney 检验)
为了扩展这些å‘现,评估了 HNSCC 患者æ¥æºçš„异ç§ç§»æ¤ç‰© (PDX) çš„ NRG1 表达水平(图 5B)。先å‰å¯¹ä¸ƒç§ HNSCC PDX 进行了表å¾å¹¶è¯„估了西妥昔å•æŠ—çš„å应 [ 40 ]ã€‚ä»Žæ—©æœŸä¼ ä»£è‚¿ç˜¤ä¸é‡‡é›† PDX æ ·å“,并通过å…ç–«å°è¿¹åˆ†æžè¯„ä¼° NRG1 的表达。有三ç§è¥¿å¦¥æ˜”å•æŠ—æ•æ„Ÿçš„ PDX(UWSCC-22ã€UWSCC-34 å’Œ UWSCC-36)和四ç§è¥¿å¦¥æ˜”å•æŠ—è€è¯çš„ PDX(UWSCC-1ã€UWSCC-17ã€UWSCC-25 å’Œ UWSCC-64)。在这个å°åž‹é˜Ÿåˆ—ä¸ï¼Œå…ç–«å°è¿¹åˆ†æžæ˜¾ç¤ºï¼Œä¸Žè¥¿å¦¥æ˜”å•æŠ—æ•æ„Ÿçš„ PDX 相比,西妥昔å•æŠ—è€è¯çš„ PDX å¹³å‡è¡¨è¾¾ NRG1 大约 8 å€ï¼ˆå›¾ 5 B,* p < 0.05)。总之,这些数æ®è¡¨æ˜Ž NRG1 在西妥昔å•æŠ—è€è¯çš„ HNSCC ä¸è¿‡åº¦è¡¨è¾¾ã€‚
AXL 调节 NRG1 导致西妥昔å•æŠ—è€è¯
我们的数æ®è¡¨æ˜Ž AXL å¢žåŠ äº† HER3 活化,导致西妥昔å•æŠ—è€è¯ã€‚æ¤å¤–,AXLçš„è¿‡è¡¨è¾¾å¢žåŠ äº†è¥¿å¦¥æ˜”å•æŠ—抗性细胞ä¸NRG1的表达水平,并且西妥昔å•æŠ—抗性PDX比西妥昔å•æŠ—æ•æ„Ÿçš„PDX具有更多的NRG1表达(图 5ï¼‰ã€‚å› æ¤ï¼Œæˆ‘们å‡è®¾ NRG1 å¯èƒ½å¯¹ AXL 介导西妥昔å•æŠ—è€è¯è‡³å…³é‡è¦ã€‚为了测试这一点,我们通过 siRNA 在 PCI37A-AXL 细胞ä¸é¶å‘ NRG1,并用西妥昔å•æŠ—å¤„ç† 72 å°æ—¶ã€‚细胞增殖测定表明 NRG1 表达的丧失使细胞对西妥昔å•æŠ—é‡æ–°æ•æ„Ÿï¼ˆå›¾ 6一ç§ï¼‰ã€‚在用 siNRG1 和西妥昔å•æŠ—处ç†çš„ PCI37A-AXL 细胞ä¸ï¼ŒHER3 å’Œ AKT 的磷酸化显ç€é™ä½Žã€‚总的æ¥è¯´ï¼Œè¿™äº›ç»“果表明 AXL 通过 NRG1 å‘出信å·ä»¥ä¿ƒè¿›è¥¿å¦¥æ˜”å•æŠ—è€è¯ã€‚
图 6
AXL 调节 NRG1 导致西妥昔å•æŠ—è€è¯ã€‚用 30 nM NRG1 siRNA 或 30 nM siNT对 PCI37A-AXL 细胞进行电镀和处ç†ã€‚第二天,用 100 nM çš„ 100 nM IgG 或 100 nM 西妥昔å•æŠ— (Ctx) 处ç†ç»†èƒž 72 å°æ—¶ã€‚使用CCK8测定在è¯ç‰©å¤„ç†åŽæµ‹é‡ç»†èƒžå¢žæ®–。平å‡å€¼ã€SEs 和统计分æžä»£è¡¨ä¸ƒä¸ªç‹¬ç«‹å®žéªŒã€‚N  = 6–10,** P  < 0.01。在处ç†åŽ 24 å°æ—¶æ”¶é›†å…¨ç»†èƒžè£‚解物,通过 SDS-PAGE 分级,并对所示蛋白质进行å…ç–«å°è¿¹ã€‚GAPDH ç”¨ä½œä¸Šæ ·å¯¹ç…§ã€‚B æ出的 AXL 调节 NRG1 导致 Ctx 抗性的模型
讨论
ç›®å‰çš„报告æ供的数æ®è¡¨æ˜Žï¼ŒAXL å¯ä»¥é€šè¿‡ NRG1 通过 HER3 å‘出信å·ï¼Œä»¥ä¿ƒè¿› HNC ä¸çš„西妥昔å•æŠ—è€è¯æ€§ã€‚值得注æ„的是,我们的模型è¯æ˜Ž NRG1 对西妥昔å•æŠ—è€è¯æ˜¯å¿…è¦å’Œå……分的。进一æ¥ç ”究表明,AXL å¯ä»¥è°ƒèŠ‚ NRG1 的表达,从而促进对西妥昔å•æŠ—çš„è€è¯æ€§ã€‚这些å‘现共åŒè¡¨æ˜Ž AXL å’Œ NRG1 表达å¯ä»¥é¢„测患者对西妥昔å•æŠ—治疗的ååº”ï¼Œå¹¶åŠ å¼ºåœ¨ HNC 治疗ç–ç•¥ä¸ä½¿ç”¨ AXL 或 NRG1 é¶å‘治疗的基本原ç†ã€‚
æˆ‘ä»¬å®žéªŒå®¤å’Œå…¶ä»–ç ”ç©¶äººå‘˜ä¹‹å‰çš„ç ”ç©¶è¡¨æ˜Žï¼Œåœ¨å¯¹ EGFR é¶å‘产生è€è¯æ€§åŽï¼Œå‡ ç§å—ä½“é…ªæ°¨é…¸æ¿€é…¶çš„è¡¨è¾¾æ°´å¹³å¢žåŠ ï¼ŒåŒ…æ‹¬ AXL å’Œ HER3ã€‚ç™Œç—‡ä¸ AXL 的改å˜è¡¨è¾¾å·²è¢«ç ”究为对西妥昔å•æŠ—的获得性è€è¯æœºåˆ¶ï¼Œå¹¶ä¸”å·²è¯æ˜Ž AXL çš„é¶å‘å¯ä½¿ç»†èƒžå’Œè‚¿ç˜¤å¯¹ EGFR é¶å‘治疗é‡æ–°æ•æ„Ÿã€‚在西妥昔å•æŠ—è€è¯æ¨¡åž‹ä¸ä¹Ÿè§‚察到 EGFR 家æ—æˆå‘˜ HER3 çš„è¡¨è¾¾å¢žåŠ ï¼Œä»Žè€Œå¯¼è‡´å¼€å‘äº†å‡ ç§ EGFR-HER3 å…±åŒé¶å‘治疗ç–ç•¥ã€‚åœ¨æœ¬ç ”ç©¶ä¸ï¼Œæˆ‘们å‘现 AXL 的过表达导致西妥昔å•æŠ—è€è¯å’Œ HER3 æ´»æ€§å¢žåŠ ï¼ˆå›¾ 1),而 HER3 是 AXL 介导西妥昔å•æŠ—è€è¯æ‰€å¿…需的(图 2)。我们还å‘现å•ç‹¬çš„ HER3 过表达ä¸è¶³ä»¥å¯¼è‡´ HNSCC 细胞对西妥昔å•æŠ—çš„è€è¯æ€§ï¼ˆå›¾ 3)。å…ç–«å°è¿¹åˆ†æžæ˜¾ç¤º HER3 的过表达ä¸ä¼šå¢žåŠ AXL 活性(图 3)。这些结果表明 AXL å’Œ HER3 的过表达å¯èƒ½æ˜¯è¥¿å¦¥æ˜”å•æŠ—è€è¯æ‰€å¿…需的。尽管 HER3 é¶å‘在克æœè¥¿å¦¥æ˜”å•æŠ—è€è¯æ€§æ–¹é¢å–得了广泛的临床å‰æˆåŠŸ ,HER3 抑制剂与西妥昔å•æŠ—的组åˆä¸Žå•ç‹¬çš„西妥昔å•æŠ—治疗相比没有表现出临床æˆåŠŸã€‚å› æ¤ï¼Œæˆ‘们实验室继ç»ç ”究 HER3 çš„ä¿¡å·ä¼ 导作用,å‘现也许 AXL å’Œ NRG1 在西妥昔å•æŠ—è€è¯é€”径ä¸æ›´é‡è¦ã€‚
在目å‰çš„ç ”ç©¶ä¸ï¼Œæˆ‘们å‘现将 NRG1 æ·»åŠ åˆ°è¥¿å¦¥æ˜”å•æŠ—æ•æ„Ÿçš„ HN30 å’Œ PCI37A 细胞系ä¸ä¼šä½¿è¿™äº›ç»†èƒžå¯¹è¥¿å¦¥æ˜”å•æŠ—产生è€è¯æ€§ï¼ˆå›¾ 4Aï¼‰ã€‚æ ¹æ®è¯¥æ•°æ®ï¼Œæˆ‘们之å‰æŠ¥é“ NRG1 自分泌信å·æ˜¯èŽ·å¾—性西妥昔å•æŠ—è€è¯çš„主è¦é©±åŠ¨å› ç´ ã€‚æˆ‘ä»¬è¿˜å‘现,与载体对照相比,西妥昔å•æŠ—抗性 HN30-AXL å’Œ PCI37A- AXLC1细胞相对表达更多 NRG1(图 5A),并且西妥昔å•æŠ—抗性 PDX 肿瘤比西妥昔å•æŠ—æ•æ„Ÿ PDX 具有更多 NRG1(图 5B, * p < 0.05)。这些å‘现表明 AXL å¯ä»¥è°ƒèŠ‚西妥昔å•æŠ—è€è¯ HNSCC 细胞ä¸çš„ NRG1。æ¤å¤–,对 TCGA ä¸ 89 个 HPV(+) å’Œ 409 个 HPV(-) 原å‘性 HNC è‚¿ç˜¤æ ·æœ¬ä»¥åŠç™Œç»†èƒžç³»ç™¾ç§‘全书 (CCLE) ä¸çš„ 33 个 HNC 细胞系的分æžæ˜¾ç¤º AXL å’Œ NRG1 mRNA 水平呈æ£ç›¸å…³ï¼ˆè¡¥å……图 S 3 )。有趣的是,尽管 AXL 过表达,但 PCI37A-AXLC2 细胞与载体对照相比没有表达更多的 NRG1(图 5A),而西妥昔å•æŠ—è€è¯çš„ PDX 肿瘤(UW-SCC25)å³ä½¿å…·æœ‰ AXL 表达也ä¸è¡¨è¾¾ NRG1(图 5)。5 B)。许多å°ç»„å·²ç»å¼€å§‹ç ”究 NRG1 在癌症ä¸çš„表达,以åŠè¿™ä¸Žä¸åŒç»“果的治疗å应之间的关系。会è§ç‰äººã€‚å‘现 NRG1 表达与 HER3 抑制性抗体 AV-203的肿瘤生长抑制之间å˜åœ¨æ˜¾ç€ç›¸å…³æ€§ï¼Œå¦ä¸€é¡¹ç ”究表明 HER3 抑制在 NRG1 é‡æŽ’癌症ä¸å¯èƒ½éžå¸¸æœ‰æ•ˆã€‚å·´ç½—ç‰äººã€‚还å‘现自分泌 NRG1 ä¿¡å·ä¼ 导的上调是 HNSCC 肿瘤ä¸è¥¿å¦¥æ˜”å•æŠ—è€è¯çš„机制。使用 HER3 抗体 CDX-3379,他们能够克æœè¥¿å¦¥æ˜”å•æŠ—è€è¯æ€§å¹¶å¢žå¼ºè‚¿ç˜¤ç”Ÿé•¿å»¶è¿Ÿå’Œæ”¾å°„æ•æ„Ÿæ€§ 。相åï¼Œä¸€é¡¹ç ”ç©¶å‘现 HER3 的表达并ä¸è¡¨æ˜Žå¯¹ HER3 抗体或西妥昔å•æŠ—çš„æ•æ„Ÿæ€§ã€‚他们è¯æ˜Žï¼ŒNRG1 表达以åŠå…¶ä»– EGFR æ¿€æ´»ç”Ÿç‰©æ ‡å¿—ç‰©ä¸Žæ›´å¥½çš„æŠ— HER3 ååº”ç›¸å…³ã€‚åœ¨è¿™é¡¹ç ”ç©¶ä¸ï¼ŒsiRNA è”åˆè¥¿å¦¥æ˜”å•æŠ—治疗对 NRG1 表达的敲低通过æŸå®³è¥¿å¦¥æ˜”å•æŠ—抗性 PCI37A-AXL 细胞ä¸çš„ AKT å˜æ´»ä¿¡å·ä¼ 导导致细胞增殖å‡å°‘(图 6A)。由于ä¸åŒç™Œç—‡æ¨¡åž‹çš„结果ä¸åŒï¼Œå¿…须完æˆå¯¹ NRG1 表达和西妥昔å•æŠ—ååº”çš„æ›´å¤šç ”ç©¶ã€‚è¿˜å¯ä»¥ä½¿ç”¨ä¸¤ç§é’ˆå¯¹ NRG1 的高亲和力å•å…‹éš†æŠ—体æ¥ç ”究 NRG1 抑制和对西妥昔å•æŠ—é‡æ–°æ•æ„Ÿçš„é¢å¤–测试或一ç§æŠ— NRG1 抗体,在胰腺癌的临床å‰æ¨¡åž‹ä¸æ˜¾ç¤ºå‡ºå¯¹è‚¿ç˜¤ç”Ÿé•¿çš„抑制作用。总的æ¥è¯´ï¼Œå…¶ä¸æ供的数æ®æŽ¢è®¨äº†åœ¨ HNC ä¸è¥¿å¦¥æ˜”å•æŠ—è€è¯çš„情况下 AXLã€NRG1 å’Œ HER3 之间的信å·è¿žæŽ¥ï¼ˆå›¾ 6B)。
结论
我们已ç»è¯æ˜Žï¼Œåœ¨æˆ‘们的模型ä¸ï¼ŒNRG1 表达比 HER3 表达对于西妥昔å•æŠ—è€è¯æ˜¯å¿…è¦å’Œå……分的,并且 RTK AXL å¯ä»¥è°ƒèŠ‚ NRG1 的表达。该数æ®è¯å®žäº† HER3 å’Œ AXL è”åˆæ²»ç–—å¯èƒ½æ¯”å•ç‹¬é’ˆå¯¹ä»»ä½•ä¸€ç§æ²»ç–—更有效的å‘现。必须进行进一æ¥æŽ¢ç´¢ä»¥ç¡®å®š AXL å’Œ NRG1 的共表达是å¦å¯ä»¥ç”¨ä½œé¢„测对西妥昔å•æŠ—è€è¯çš„ç”Ÿç‰©æ ‡å¿—ç‰©ï¼Œæˆ–è€… AXL 或 NRG1 çš„é¶å‘ç–略是å¦ä¼šåœ¨è€è¯æƒ…况下æ供治疗优势。
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