è‡ªä¸»é›„æ¿€ç´ å—体信å·åœ¨å‰åˆ—腺癌起始ä¸çš„作用是二分法的...
摘è¦è‡ªä¸»é›„æ¿€ç´ å—体信å·åœ¨å‰åˆ—腺癌起始ä¸çš„作用是二分法的,å–决于致癌信å·æŠ½è±¡çš„ç±»å›ºé†‡æ¿€ç´ ä¿¡å·è½´è¢«è®¤ä¸ºåœ¨è®¸å¤šæ¿€ç´ 调节的上皮肿瘤的起始和进展ä¸èµ·æ ¸å¿ƒä½œç”¨ã€‚ç›®å‰å°šä¸æ¸…楚是å¦æ‰€æœ‰çš„癌症起始信å·éƒ½ä¾èµ–äºŽå®Œæ•´çš„æ¿€ç´ å—体信å·æœºåˆ¶ã€‚ä¸ºäº†ç¡®å®šç»†èƒžè‡ªä¸»é›„æ¿€ç´ å—体 (AR) 是å¦å¯¹å‰åˆ—è…ºä¸Šçš®å†…ç˜¤å˜ (PIN) çš„å‘生至关é‡è¦ï¼Œä½¿ç”¨å‰åˆ—è…ºå†ç”Ÿæ¨¡åž‹ç³»ç»Ÿåœ¨ä½“内评估了 AR æ— æ•ˆçš„å‰åˆ—腺上皮细胞对æ—分泌和细胞自主致癌信å·çš„å应。AR 的上皮特异性缺失阻æ–了æ—分泌 FGF10 诱导的 PIN,而外æºæ€§ AR çš„æ·»åŠ æ¢å¤äº†è¿™ç§å应。相比之下,由细胞自主ã€æ…¢æ€§æ¿€æ´»çš„ AKT 引å‘çš„ PIN 独立于上皮 AR ä¿¡å·ä¼ å¯¼ã€‚æˆ‘ä»¬çš„ç ”ç©¶ç»“æžœè¡¨æ˜Žï¼ŒAR 在 PIN å¯åŠ¨ä¸çš„选择性作用å–决于驱动肿瘤形æˆçš„ä¿¡å·é€šè·¯ã€‚æ·±å…¥äº†è§£æ¿€ç´ å—体信å·ä¼ 导在上皮肿瘤起始ä¸çš„作用å¯èƒ½æœ‰åŠ©äºŽå°†è¯¥è½´å®šä¹‰ä¸ºç™Œç—‡åŒ–å¦é¢„防的é¶æ ‡ã€‚é¶å‘æ¿€ç´ å—体信å·è½¬å¯¼çš„è¯ç‰©åˆ¶å‰‚å¹¿æ³›ç”¨äºŽæ²»ç–—ç”±ä¹³è…ºï¼ˆé›Œæ¿€ç´ å—体;ER)ã€å‰åˆ—è…ºï¼ˆé›„æ¿€ç´ å—体;AR)和å宫内膜(ER,和å•æ¿€ç´ å—体;PR)引起的癌症。目å‰å°šä¸æ¸…æ¥šæ¿€ç´ å—体信å·è½´æ˜¯å¦åœ¨è¿™äº›æ¶æ€§è‚¿ç˜¤çš„å‘生ä¸èµ·è‡´ç—…作用,或者它是å¦å¯ä»¥è¢«è‡´ç™Œä¿¡å·ç»•è¿‡ã€‚PR 的丧失对å°é¼ 7,12-二甲基苯(a)蒽 (DMBA) 引起的乳腺肿瘤的å‘生具有ä¿æŠ¤ä½œç”¨ã€‚这些结果表明,通过 DMBA 引å‘乳腺癌å–决于 PR ä¿¡å·ã€‚相åï¼Œé›Œæ¿€ç´ å—体敲除å°é¼ 在å“应 Wnt-1 表达时å‘展出与对照相似的乳腺肿瘤,这表明这些肿瘤的å‘生与 ER ä¿¡å·ä¼ å¯¼æ— å…³ã€‚é›„æ¿€ç´ æ¶ˆèžåœ¨æ²»ç–—å‰åˆ—腺癌方é¢çš„ç›Šå¤„åœ¨å‡ åå¹´å‰å°±å·²ç»å¾—到è¯å®žã€‚然而,自主和外在 AR 在å‰åˆ—腺癌å‘ç—…ä¸çš„作用ä»ç„¶æœªçŸ¥ã€‚
å‰åˆ—腺是一ç§è·å°”蒙调节的腺体。在å‘育过程ä¸ï¼Œé›„æ¿€ç´ ä»‹å¯¼çš„å¯¹å‰åˆ—腺上皮的影å“被认为是由基质 AR 驱动的。该模型æºè‡ªé¼ 胚胎泌尿生殖组织片段é‡ç»„ç ”ç©¶ã€‚åœ¨é‡Žç”Ÿåž‹ (WT) 基质的诱导作用下,æ¥è‡ªç¾ä¸¸å¥³æ€§åŒ– (Tfm) å°é¼ 的功能性 AR æ— æ•ˆä¸Šçš®ç»†èƒžä¼šäº§ç”Ÿå‰åˆ—è…ºæ ·è…ºä½“ã€‚ç›¸å,当 Tfm 基质与 WT 上皮细胞结åˆæ—¶ï¼Œå‰åˆ—腺没有å‘育。基质对上皮的诱导作用被认为是通过分泌“andromedinsâ€ã€‚é›„æ¿€ç´ å‡è¯´è¡¨æ˜Žå¾ªçŽ¯é›„æ¿€ç´ ä¸ŽåŸºè´¨ AR 的结åˆè¯±å¯¼å¯æº¶æ€§å› åçš„é‡Šæ”¾ï¼Œè¿™äº›å› å通过与åŒæºä¸Šçš®å—体结åˆæ¥åè°ƒå‰åˆ—è…ºçš„ç”Ÿé•¿å’Œåˆ†åŒ–ã€‚é›„æ¿€ç´ è¢«å®šä¹‰ä¸ºåœ¨é›„æ¿€ç´ å应性组织ä¸è¡¨è¾¾çš„æ—åˆ†æ³ŒåŸºè´¨å› åï¼Œå…¶è¡¨è¾¾å¿…é¡»ç”±é›„æ¿€ç´ è°ƒèŠ‚ã€‚ç‰µè¿žçš„ä»™å¥³ç´ åŒ…æ‹¬æˆçº¤ç»´ç»†èƒžç”Ÿé•¿å› å (FGF) 7ã€FGF10 å’Œèƒ°å²›ç´ ç”Ÿé•¿å› å 1ã€‚å› ä¸ºè¿™äº›éƒ½ä¸æ˜¯é›„æ¿€ç´ è°ƒèŠ‚çš„ï¼ŒçœŸæ£çš„ andromedin ä»ç„¶æ— 法识别。
æ£å¸¸å‰åˆ—腺细胞å‘癌症的转å˜è¢«è®¤ä¸ºæ˜¯éšç€ä»Žæ—分泌到细胞自主 AR ä¿¡å·çš„转æ¢è€Œå‘ç”Ÿçš„ã€‚ç›¸å…³ç ”ç©¶è¡¨æ˜Žï¼Œå‰åˆ—腺癌转移ä¸çš„上皮 AR 表达水平较高,但肿瘤基质ä¸çš„ AR æ°´å¹³è¾ƒä½Žã€‚ä½“å†…ç ”ç©¶è¡¨æ˜Žï¼Œæ¤å…¥ AR-null 宿主å°é¼ çš„å‰åˆ—腺癌异ç§ç§»æ¤ç‰©çš„有效生长。这些结果表明,已建立肿瘤的æŒç»ç”Ÿé•¿ä¾èµ–于上皮 AR,但并未解决其在癌症å‘生ä¸çš„作用。
å·²ç»ç ”究了细胞自主 AR 在å‰åˆ—腺癌形æˆä¸çš„作用。当在å°é¼ å‰åˆ—è…ºçš„è½¬åŸºå› è…ºç™Œâ€‹â€‹ (TRAMP) 模型ä¸å®žçŽ° probasin å¯åŠ¨å驱动的å‰åˆ—腺上皮 AR 缺失时,与对照相比,å‘现了更具侵è¢æ€§å’Œè½¬ç§»æ€§çš„ç™Œç—‡ã€‚åœ¨è¿™äº›ç ”ç©¶ä¸ï¼Œä¸Šçš® AR èµ·åˆ°è‚¿ç˜¤æŠ‘åˆ¶å› å的作用。å‰åˆ—腺上皮主è¦ç”±è…”细胞和基底细胞组æˆã€‚尽管éšç€æ—¶é—´çš„推移,大多数å‰åˆ—腺上皮细胞ä¸çš„ AR 缺失,但在该模型ä¸ï¼ŒAR 在 12 周龄时ä»åœ¨ 50% 的基底细胞ä¸è¡¨è¾¾ã€‚å› æ¤ï¼Œç»“论å¯èƒ½å—é™äºŽå‰©ä½™çš„ AR 阳性基底细胞,它们是潜在的å‰åˆ—腺干细胞和å‰åˆ—腺癌å‘生的有效é¶æ ‡ã€‚
å‰åˆ—è…ºä¸Šçš®å†…ç˜¤å˜ (PIN) 是一ç§å…¬è®¤â€‹â€‹çš„å‰åˆ—腺癌å‰é©±ç—…å˜ã€‚为了评估细胞自主 AR 在å‰åˆ—腺癌ä¸çš„作用,我们使用了两ç§å¯ä»¥å¯åŠ¨ PIN çš„ä¿¡å·ï¼Œå³ FGF10 çš„æ—分泌信å·å’Œè‚‰è±†è”»é…°åŒ– AKT 的细胞自主信å·ã€‚FGF10 å’Œ AKT 癌症起始信å·ä¹‹é—´å˜åœ¨é‡è¦å·®å¼‚。æ—分泌 FGF10 主è¦é€šè¿‡ç»“åˆå‰åˆ—腺上皮æˆçº¤ç»´ç»†èƒžç”Ÿé•¿å› åå—体 1 (FGFR1) (å‘挥其作用。FGF10-FGFR1 çš„ä¿¡å·ä¼ 导导致多个é¶æ ‡çš„激活,包括 AKT并且å—到多个级别的监管。å“åº”ç”Ÿé•¿å› åå—体信å·ï¼ŒAKT 被募集到质膜,在那里它被磷酸化激活,但它会被磷酸酶失活。FGFR ä¿¡å·è½´åœ¨å…¶ä»–水平上å—到调节,包括å—体内化和é™è§£ã€‚相å,AKT 的肉豆蔻酰化由于质膜定ä½å’Œä¸æ°¨é…¸/è‹æ°¨é…¸è›‹ç™½æ¿€é…¶ 的组æˆåž‹æ¿€æ´»è€Œå¯¼è‡´æ…¢æ€§ä¿¡å·ä¼ 导)。我们之å‰çš„ç ”ç©¶è¡¨æ˜Žï¼Œç”±æ—分泌 FGF10 引å‘çš„ PIN æŸä¼¤å…·æœ‰é«˜æ°´å¹³çš„上皮 AR,而 AKT 介导的æŸä¼¤å…·æœ‰æ£å¸¸çš„上皮 AR 表达。这些观察导致了当å‰çš„ç ”ç©¶å‡è®¾ï¼šAR 的细胞自主信å·ä¼ 导å¯èƒ½åœ¨ FGF10 çš„å¯åŠ¨ä¸èµ·æ ¸å¿ƒä½œç”¨ï¼Œä½†åœ¨ AKT 诱导的å‰åˆ—腺瘤形æˆä¸æ²¡æœ‰ã€‚我们选择了使用分离的å‰åˆ—腺上皮和基质的å†ç”Ÿç³»ç»Ÿï¼Œå› 为它能够处ç†ä»Žæš´éœ²äºŽä¿ƒç”Ÿé•¿ä¿¡å·å¼€å§‹å°±ä¸º AR æ— æ•ˆçš„å‰åˆ—腺上皮细胞群。我们评估了上皮 AR 在通过æ—分泌 (FGF10) 和细胞自主 (AKT) 致癌信å·å¯åŠ¨ PIN ä¸çš„作用。我们è¯æ˜Žäº†è‡ªä¸» AR ä¿¡å·åœ¨å‰åˆ—腺瘤形æˆä¸çš„选择性作用,这å–决于特定的生长促进信å·ã€‚
结果Tfm 泌尿生殖窦上皮细胞在强æ—分泌 FGF10 ä¿¡å·ä¼ 导的情况下ä¸èƒ½å½¢æˆ PIN。
我们首先使用æ¥è‡ªåŠŸèƒ½æ€§ AR-null çªå˜å°é¼ 的胚胎组织æ¥è¯¢é—®é€šè¿‡ AR å‘出的信å·æ˜¯å¦å¯¹äºŽ FGF10 诱导的瘤形æˆçš„起始至关é‡è¦ã€‚Tfm å°é¼ 在 AR ä¸å˜åœ¨çªå˜ï¼Œå¯¼è‡´å—ä½“æ— æ³•ä¸Žé…体结åˆï¼Œä¸ç¨³å®šä¸”æ— æ´»æ€§ã€‚ç»“æžœï¼Œæˆå¹´é›„性 Tfm å°é¼ çš„å‰åˆ—è…ºå‘育ä¸å…¨ã€‚å› æ¤ï¼Œåœ¨è¿™äº›å®žéªŒä¸ï¼Œä½¿ç”¨äº†äº§ç”Ÿå‰åˆ—腺的胚胎组织,å³æ³Œå°¿ç”Ÿæ®–窦上皮 (UGSE)。我们首先è¯æ˜Žäº†æˆ‘们在体内å†ç”Ÿè¯•éªŒä¸åŸ¹å…»åˆ†ç¦»çš„胚胎 WT UGSE å’Œ WT 泌尿生殖窦间充质(UGSM)群体的能力(图S1A)。
为了评估 AR 在 FGF10 诱导的瘤形æˆä¸çš„作用,将分离的 Tfm 或 WT UGSE 悬浮液与表达 FGF10 çš„ UGSM é‡ç»„(图S1B)。WT UGSE 与 FGF10-UGSM çš„é‡ç»„导致高级别 PIN 和腺癌的形æˆï¼ˆå›¾1A)。å†ç”Ÿå°ç®¡è¡¨è¾¾é«˜æ°´å¹³çš„æ ¸AR(图1 A,b)。形æˆé²œæ˜Žå¯¹æ¯”的是,Tfm UGSE 与 FGF10-UGSM çš„é‡ç»„导致形æˆä¸€å±‚厚的èŽç¼©æ€§ç®¡çŠ¶ç»“æž„ï¼Œè€Œæ²¡æœ‰å¢žç”Ÿçš„æ ‡å¿—ï¼ˆå›¾ 1B )。Tfm å†ç”Ÿå°ç®¡ä¸ä¸å˜åœ¨ AR 表达,而在这些移æ¤ç‰©çš„基质细胞ä¸æ£€æµ‹åˆ°æ ¸ AR(图 1 Bã€b和图 S1 C )。两ç§ç§»æ¤ç‰©çš„显ç€å·®å¼‚ä¸æ˜¯ç”±äºŽ FGF10 表达的差异。对所有 FGF10-UGSM 进行 Q-PCR 以确认过表达(图 S2 A)并用 GFP æ ‡è®°è¿›è¡Œè·Ÿè¸ªï¼ˆå›¾ S2 B)。我们的结果表明,尽管暴露于æ—分泌 FGF10,但 Tfm 上皮细胞ä¸ä¼šå½¢æˆå¢žç”Ÿã€‚基于泛角蛋白和 CK8 的表达,WT å’Œ Tfm å†ç”Ÿçš„å°ç®¡éƒ½æ˜¯ä¸Šçš®çš„(图 1 Aã€cå’Œd,以åŠBã€cå’Œd)。Tfm å†ç”Ÿçš„å°ç®¡ç¼ºä¹åˆ†æ³Œç‰©å¹¶ä¸”å…·æœ‰è¡¨è¾¾è…”æ ‡è®° CK8 å’ŒåŸºç¡€æ ‡è®° p63(图 1B 〠då’Œe )但ä¸è¡¨è¾¾ CK5(图 1B 〠f )的ä¸é—´è¡¨åž‹ã€‚
图1。
尽管æ—分泌 FGF10,但 Tfm 上皮细胞并未å˜å¾—增生。4×10 4 WT(一)或Tfm(乙)解离的UGSE与1×10 5 FGF10-UGSMé‡ç»„并在体内å†ç”Ÿã€‚( A ) æ—分泌 FGF10 导致 WT UGSE ( a, c ) å½¢æˆå¢žç”Ÿå’Œå¼‚常腺体。在从 WT UGSE ( b )å†ç”Ÿçš„å°ç®¡ä¸æ£€æµ‹åˆ°é«˜æ°´å¹³çš„上皮 AR 。å“应æ—分泌 FGF10çš„è…” ( d ) 和基底细胞 ( eå’Œf ) 都有扩增。( B ) Tfm UGSE å½¢æˆå•å±‚腺结构,没有增生 ( a)。从 Tfm UGSE ( b ) å†ç”Ÿçš„å°ç®¡ä¸ä¸å˜åœ¨ä¸Šçš® AR。Tfm å†ç”Ÿå°ç®¡æ˜¯ä¸Šçš®çš„ ( c )ï¼Œè¡¨è¾¾è…”æ ‡è®° CK8 ( d ) å’ŒåŸºåº•æ ‡è®° p63 ( e ),但ä¸è¡¨è¾¾ CK5 ( f )。(比例尺:100 μm。)
我们å‡è®¾å°† AR æ·»åŠ å›ž Tfm UGSE å¯ä»¥æ¢å¤å¯¹æ—分泌 FGF10 ä¿¡å·ä¼ 导的å应。从Tfm雄性å°é¼ 收获的UGSE用表达具有顺å¼è¿žæŽ¥çš„红色è§å…‰è›‹ç™½ï¼ˆRFP)的WT AR的载体感染(24),结åˆFGF10 UGSM并置于å†ç”Ÿç³»ç»Ÿä¸ï¼ˆå›¾2A)。观察到与å•å±‚èŽç¼©å°ç®¡ç›¸é‚»çš„增生区域(图2Aå’ŒB)。AR 染色显示增生区有 AR å’Œ RFP 表达(图 2 Bã€bå’Œc),而èŽç¼©åŒºæ²¡æœ‰ AR 或 RFP(图 2 Bã€eå’Œf )。AR çš„æ·»åŠ å¯¼è‡´ Tfm 上皮细胞形æˆå‰åˆ—腺增生区域,基底细胞数é‡å¢žåŠ (图 S3,aå’Œc对比bå’Œd),类似于 WT 上皮细胞对æ—分泌 FGF10 çš„å应。
图 2。
å°† AR æ·»åŠ å›ž Tfm UGSE å“应æ—分泌 FGF10 æ¢å¤äº†å¢žç”Ÿçš„å½¢æˆã€‚( A ) 1.5 x 10 5 Tfm UGSE 感染了表达慢病毒的 AR,并与 3 × 10 5 FGF10-UGSM 结åˆã€‚在å†ç”Ÿè…ºä½“ä¸ï¼Œå¯è§å¢žç”ŸåŒºåŸŸä¸Žå•å±‚èŽç¼©å°ç®¡ç›¸é‚»ã€‚( B ) åŠ å…¥ AR åŽï¼Œå¢žç”Ÿçš„ Tfm å°ç®¡ ( a ),通过å…ç–«ç»„ç»‡åŒ–å¦ ( c ) 表达 AR,以åŠæ¥è‡ªç—…毒递é€è½½ä½“çš„ RFP顺å¼è¿žæŽ¥æ ‡è®°ç‰© ( b )。åŒä¸€ç§»æ¤ç‰©ä¸ç›¸é‚»çš„éžå¢žç”Ÿæ€§å°ç®¡ ( d ) 缺ä¹ä¸Šçš® AR ( f ) 的表达并且ä¸è¡¨è¾¾ RFP (e )。(比例尺:100 μm。)
这些结果表明,自主 AR 的丧失å¯èƒ½ä¼šé˜»æ¢èƒšèƒŽå‰åˆ—腺上皮细胞对æ—分泌 FGF10 ä¿¡å·çš„å应。两ç§å¯èƒ½æ€§å¯ä»¥è§£é‡Šè¿™äº›å‘现。自主 AR ä¿¡å·å¯èƒ½å¯¹å‰åˆ—腺上皮细胞对 FGF10 ä¿¡å·çš„å应至关é‡è¦ã€‚或者,上皮 AR 的缺失å¯èƒ½ä¼šé˜»ç¢é€šå¸¸å“应æ—分泌 FGF10 ä¿¡å·ä¼ 导的胚胎å‰åˆ—腺上皮细胞的å‘育和分化。
æˆäººå‰åˆ—è…ºä¸Šçš®ç»†èƒžä¸ AR 水平的é™ä½Žé™ä½Žäº†å¯¹æ—分泌 FGF10 çš„å应,并且 AR çš„æ·»åŠ å¯ä»¥æ¢å¤è¿™ç§å应。
å‰åˆ—腺癌主è¦å½±å“æˆå¹´ç”·æ€§ã€‚在下一组实验ä¸ï¼Œé€šè¿‡ä½¿ç”¨ shRNA 敲低,æˆäººå‰åˆ—腺上皮细胞ä¸çš„内æºæ€§ AR 水平显ç€é™ä½Žã€‚é‡è¦çš„是,维æŒåŸºç¡€æ°´å¹³çš„ AR 表达以促进å†ç”Ÿå‰åˆ—腺上皮的分化。将é¶å‘é¼ ARçš„ shRNA æˆ–å¯¹ç…§ä¹±åº shRNA 克隆到带有 RFP æ ‡è®°çš„æ…¢ç—…æ¯’è½½ä½“ä¸ï¼ˆå›¾ S4 A)。è¯å®žäº† shRNA 介导的 AR 蛋白敲低(图 S4 B)。分离的 WT å‰åˆ—è…ºä¸Šçš®ç»†èƒžè¢«ä»»ä¸€æž„å»ºä½“æ„ŸæŸ“ï¼Œç»“åˆ FGF10 UGSM 并置于体内å†ç”Ÿè¯•éªŒä¸ã€‚AR 表达的é™ä½Žå¯¼è‡´è‚¿ç˜¤å†ç”Ÿç»„织的百分比é¢ç§¯å‡å°‘(图 3 A与B和图 S4 C)。shRNA-mAR 在å‰åˆ—腺上皮细胞ä¸çš„表达导致一些 RFP 阳性å°ç®¡å†ç”Ÿï¼ˆå›¾ 3 J),其 AR 水平相对较低(图 3 N与M),并且与对照组相比增生较少(图3)。 . 3 F和图 S4 D)。一些肾å°ç®¡åœ¨ç»„织å¦ä¸è¡¨çŽ°å‡ºå®Œå…¨æ£å¸¸çš„å‰åˆ—腺分泌物(图 3 F)。为了询问æˆäººä¸Šçš®ä¸ AR çš„æ·»åŠ æ˜¯å¦å¯ä»¥æŒ½æ•‘对æ—分泌 FGF10 çš„å应,人类 AR 从与 shRNA-mAR 相åŒçš„载体表达(图 S4 A),并è¯å®žäº†é€šè¿‡è¯¥è½½ä½“æ·»åŠ AR 蛋白(图S4 B)。由于 shRNA-mAR å¯¹é¼ AR çš„åºåˆ—特异性,人 AR 的表达ä¸åº”å—到影å“。通过组织å¦ï¼ˆå›¾ 3 B与图 3 D)和肿瘤å†ç”Ÿç»„织的百分比é¢ç§¯ï¼ˆå›¾ S4 C)。
图 3。
上皮 AR 水平的é™ä½Žå‡å¼±äº†å¯¹æ—分泌 FGF10 çš„å应,而 AR çš„æ·»åŠ æ¢å¤äº†æˆäººä¸Šçš®ç»†èƒžä¸çš„è¿™ç§å应。为了在 WT å°é¼ æˆå¹´ä¸Šçš®ç»†èƒžä¸æ•²é™¤ AR,使用了针对å°é¼ AR çš„ shRNA (shRNA-mAR)ã€‚åœ¨æ•²é™¤é¼ AR çš„åŒæ—¶ï¼Œé€šè¿‡åœ¨ç›¸åŒçš„慢病毒构建体 (shRNA-mAR+hAR) ä¸ä½¿ç”¨äººç±» AR 实现了 AR çš„æ·»åŠ ã€‚ä½œä¸ºå¯¹ç…§ï¼Œåœ¨æœ‰æˆ–æ²¡æœ‰äºº AR(shRNA-对照和 shRNA-对照+hAR)的情况下使用打乱 shRNA 构建体。2×10 5å‰åˆ—腺上皮细胞被æ¯ç§æ…¢ç—…毒感染,并与4×10 5 FGF10-UGSM细胞结åˆã€‚shRNA-mAR 移æ¤ç‰©ä¸å†ç”Ÿè…ºä½“的优势是æ£å¸¸çš„,而对照-shRNA 移æ¤ç‰©ä¸ä¸»è¦æ˜¯å¢žç”Ÿè…ºä½“çš„å†ç”Ÿï¼ˆAå’ŒE与Bå’ŒF)。RFP çš„è¡¨è¾¾æ ‡å¿—ç€æ…¢ç—…æ¯’æ„ŸæŸ“çš„éƒ¨ä½ ( I - L )。尽管在所有 shRNA-mAR å†ç”Ÿå°ç®¡ä¸æ£€æµ‹åˆ°æ®‹ç•™çš„ AR 水平,但与对照腺体相比,这些腺体主è¦æ˜¯æ£å¸¸çš„,上皮 AR æ°´å¹³é™ä½Žï¼ˆN vs. Mï¼‰ã€‚åŠ å…¥ hAR å¹¶ä¼´éš mAR 的丧失导致主è¦å¢žç”Ÿè…ºä½“çš„å½¢æˆï¼Œåœ¨ç»„织å¦ä¸Šä¸Ž shRNA-对照+hAR 相似(Cå’ŒG对Då’ŒH)。所有带有 AR çš„å†ç”Ÿè…ºä½“éƒ½å…·æœ‰é«˜æ°´å¹³çš„æ ¸ AR ( O, P)。(比例尺:100 μm。)
总的æ¥è¯´ï¼Œè¿™äº›ç»“果表明,æˆäººå‰åˆ—è…ºä¸Šçš®ä¸ AR 水平的é™ä½Žä¼šé™ä½Žå¯¹æ—分泌 FGF10 çš„ååº”ï¼Œå¹¶ä¸”æ·»åŠ é›„æ¿€ç´ å—体å¯ä»¥æ¢å¤è¿™ç§å应。
自主 AR ä¿¡å·åœ¨æš´éœ²äºŽæ—分泌 FGF10 çš„æˆäººå‰åˆ—腺上皮ä¸ä½œä¸ºè‚¿ç˜¤å¯åŠ¨åå‘挥作用。
上皮细胞和基质之间的串扰å¯èƒ½ä¼šå¯¼è‡´å¾®çŽ¯å¢ƒä¸çš„选择性压力,从而影å“肿瘤进展。WT å’Œ AR-null å‰åˆ—腺上皮对æ—分泌 FGF10 的差异å应å¯èƒ½æ˜¯ç”±äºŽä¸Šçš® AR 缺失导致 FGF10 诱导的肿瘤微环境å‘生改å˜ã€‚为了解决这个问题,将 WT å’Œ AR-null å‰åˆ—腺上皮细胞的混åˆç‰©æš´éœ²äºŽæ—分泌 FGF10 并在åŒä¸€ç§»æ¤ç‰©ä¸å†ç”Ÿã€‚å‰åˆ—腺上皮细胞是从å°é¼ èº«ä¸Šé‡‡é›†çš„ï¼Œå…¶ä¸ AR 被 loxP ä½ç‚¹å›ºå®šã€‚用表达 Cre é‡ç»„酶的慢病毒 FU-CreRFP 感染解离的细胞(图 S5 A),导致å‰åˆ—腺上皮细胞亚群ä¸ä¸Šçš®AR的丧失(图4A )。这些细胞与 FGF10-UGSM 结åˆå¹¶ç½®äºŽå‰åˆ—è…ºå†ç”Ÿç³»ç»Ÿä¸ï¼ˆå›¾ 4A )。得到的移æ¤ç‰©å«æœ‰å¢žç”ŸåŒºåŸŸï¼Œå…¶åˆ†æ³Œç‰©ä¸Žç¼ºä¹å‰åˆ—腺分泌物的èŽç¼©å°ç®¡ç›¸é‚»ï¼ˆå›¾ 4 Bã€aå’Œb)。增生区域表达高水平的上皮 AR,而在èŽç¼©çš„å°ç®¡ä¸ AR çš„å…疫检测很少甚至ä¸å˜åœ¨ï¼ˆå›¾ 4 Bã€cå’Œd)。鉴于所有组织(AR WT å’Œ AR-null)在åŒä¸€ç§»æ¤ç‰©ä¸å†ç”Ÿï¼Œé•¶åµŒè¡¨åž‹å¯èƒ½æ˜¯å‰åˆ—è…ºä¸Šçš®ç»†èƒžäºšç¾¤ä¸ AR 缺失的结果,而ä¸æ˜¯è‚¿ç˜¤å¾®çŽ¯å¢ƒä¸è¯±å¯¼çš„选择性压力。èŽç¼©æ€§å°ç®¡è¡¨è¾¾æ³›è§’蛋白,CK8 水平低,p63 阳性细胞很少(图 4 C和图 S5 D)。虽然CK5在增生区域表达,但在å†ç”Ÿçš„èŽç¼©å°ç®¡ä¸æœªæ£€æµ‹åˆ°ï¼ˆå›¾4C,d)。
图 4。
æˆäººå‰åˆ—腺上皮细胞自主 AR çš„ä¸§å¤±å¹¶æœªæ”¹å˜ FGF10 过度表达的基质微环境的致瘤能力。( A ) 从 AR flox /Y å°é¼ 收获的 10 5 个分离的å‰åˆ—腺上皮细胞被 Cre æ…¢ç—…æ¯’è½½ä½“æ„ŸæŸ“ï¼Œå¯¼è‡´ä¸€éƒ¨åˆ†ä¸Šçš®ç»†èƒžä¸ AR 的丢失。这些上皮细胞与 2 × 10 5 FGF10-UGSM 结åˆå¹¶å†ç”Ÿã€‚( B ) 在相åŒçš„å†ç”Ÿç§»æ¤ç‰©ä¸ï¼Œåœ¨å‡ºçŽ°èŽç¼©çš„腺体附近å‘现了增生区域 ( aå’Œb )。å…疫组织化å¦æ˜¾ç¤ºå¢žç”Ÿçš„腺体ä¸æœ‰é«˜æ°´å¹³çš„ AR,而èŽç¼©çš„å‰åˆ—è…ºä¸æ²¡æœ‰æ£€æµ‹åˆ° AR(cå’Œd )。在增生的腺体ä¸çœ‹åˆ°çš„æ£å¸¸å‰åˆ—腺分泌物在èŽç¼©çš„å°ç®¡ä¸ä¸å˜åœ¨ã€‚( C ) AR-null å†ç”Ÿå°ç®¡æ˜¯ä¸Šçš®çš„ï¼Œå› ä¸ºå®ƒä»¬è¡¨è¾¾æ³›ç»†èƒžè§’è›‹ç™½ ( a )。这些èŽç¼©çš„腺体表达低水平的å‰åˆ—è…ºè…”æ ‡è®° CK8 ( b ) 并且与相邻的对照/增生腺体 ( cå’Œd ) 相比,基底细胞的数é‡å‡å°‘。(比例尺:100 μm。)
然åŽï¼Œæˆ‘们想比较 AR-null 与 WT æˆäººå‰åˆ—腺上皮细胞暴露于æ—分泌 FGF10 的增殖情况。鉴于 AR 的自主丧失ä¸å½±å“肿瘤微环境,æˆäºº AR æ— æ•ˆå‰åˆ—腺上皮细胞的百分比在æ¯ä¸ªå†ç”Ÿç§»æ¤ç‰©ä¸å¯Œé›†ã€‚æ¥è‡ªæˆå¹´ AR flox /Y å°é¼ çš„CD49f 阳性å‰åˆ—腺上皮细胞进行è§å…‰æ¿€æ´»ç»†èƒžåˆ†é€‰ (FACS) 并用 FU-Cre-CRW (图 S5 B ) 或 RFP 对照慢病毒感染。细胞与 FGF10 UGSM 结åˆå¹¶åœ¨ä½“外培养以å…许病毒整åˆå’Œè½¬åŸºå› 表达。48 å°æ—¶åŽï¼Œé€šè¿‡ FACS 分离 RFP 阳性细胞(图5A),与 FGF10-UGSM 结åˆå¹¶ç½®äºŽå‰åˆ—è…ºå†ç”Ÿè¯•éªŒä¸ã€‚与对照相比,å‰åˆ—腺上皮细胞生长å‡å°‘,AR(Cre 表达)缺失(图 S6 A,a与图 S6 B,a)。这些结果表明,å³ä½¿åœ¨è¡¨è¾¾ WT AR 的基质å˜åœ¨çš„情况下,上皮 AR 也å¯èƒ½å¯¹å‰åˆ—è…ºå°ç®¡çš„å†ç”Ÿå¾ˆé‡è¦ã€‚在表达 Cre 的移æ¤ç‰©ä¸å†ç”Ÿçš„大多数å°ç®¡æ˜¯èŽç¼©çš„ã€å•å±‚çš„ã€AR 阴性和 RFP 阳性(图 5 Cã€aå’Œb和图 S6 Bã€aå’Œb)。相å,在对照移æ¤ç‰©ä¸å†ç”Ÿçš„å°ç®¡æ˜¯å¢žç”Ÿçš„å¹¶ä¸”è¡¨è¾¾é«˜æ°´å¹³çš„æ ¸AR(图5 B,aå’Œb以åŠå›¾S6 A,a)。通过 PCR 检测从 LCM 解剖组织ä¸æå–çš„ DNA ä¸çš„ Cre,其身份通过测åºéªŒè¯ï¼ˆå›¾ S6 C)。AR null å’Œ WT å‰åˆ—è…ºä¸Šçš®ç»†èƒžçš„å¢žæ®–æŒ‡æ•°é€šè¿‡æµ‹é‡ AR null å’Œ WT FGF10 移æ¤ç‰©ä¸ Ki67 阳性细胞的百分比æ¥é‡åŒ–(图 5 D和图 5 B,c与图 5 C,c)。为了确定从G 1期过渡到S期的å‰åˆ—腺上皮细胞的数é‡ï¼Œè¿˜æµ‹é‡äº†ç»†èƒžå‘¨æœŸè›‹ç™½D1的表达(图5 D和图5 B,d与图5 C,d)。尽管有æ—分泌 FGF10 ä¿¡å·ä¼ 导,但éšç€ä¸Šçš® AR 的丧失,注æ„到增殖(Ki67 阳性)和循环(表达细胞周期蛋白D1)的å‰åˆ—腺上皮细胞显ç€å‡å°‘(图5D )。这些结果表明,通过æ—分泌 FGF10 å¯åŠ¨ PIN ä¾èµ–于完整的上皮 AR ä¿¡å·æœºåˆ¶ï¼Œè¯¥æœºåˆ¶ä¿ƒè¿›å‰åˆ—腺上皮细胞å“应 FGF10 的生长。
图 5。
上皮 AR 作为肿瘤å¯åŠ¨åå“应æ—分泌 FGF10 ä¿¡å·ä¼ 导。( A ) CD49f 阳性ã€FACS 分选的 AR flox / Y å‰åˆ—腺上皮细胞感染 FU-Cre-CRW 或 FUCRW æ…¢ç—…æ¯’æ ‡è®° RFPï¼Œç»“åˆ FGF10 UGSM 并置于体外培养。48 å°æ—¶åŽï¼ŒRFP 阳性 FACS 分选的细胞与 FGF10-UGSM 组åˆå¹¶ç½®äºŽå†ç”Ÿè¯•éªŒä¸ã€‚( B ) 对照å†ç”Ÿç»„织增生 ( a ) 并å“应 FGF10 ( b )表达高水平的上皮 AR 。这些移æ¤ç‰©ä¸çš„增生组织是 Ki67 阳性 ( c ) 并表达细胞周期蛋白 D1 ( d )。( C) éšç€ AR 的丧失,å†ç”Ÿçš„å°ç®¡ä¸»è¦æ˜¯èŽç¼©çš„ ( a )。å†ç”Ÿçš„èŽç¼©å°ç®¡å‘ˆ AR 阴性(b)。这些腺体ä¸åªæœ‰å°‘数细胞表达 Ki67(C)或细胞周期蛋白 D1(D)(D)与 WT AR å†ç”Ÿè…ºä½“相比,AR æ— æ•ˆå°ç®¡ä¸è¡¨è¾¾ Ki67 和表达细胞周期蛋白 D1 的细胞的百分比显ç€é™ä½Žã€‚结果表示为平å‡é˜³æ€§ç™¾åˆ†æ¯”±1 SD。(比例尺:100 μm。)
AKT å‘èµ·çš„ PIN 独立于细胞自主 AR ä¿¡å·è€Œå¼€å‘。
PTEN 的缺失导致 AKT 的细胞自主激活,是与å‰åˆ—腺腺癌相关的常è§åŸºå› 改å˜ã€‚AKT pleckstrin åŒæºç»“构域的çªå˜ä¹ŸæŠ¥å‘Šåœ¨å‰åˆ—腺癌ä¸ï¼Œå¯¼è‡´ AKT 激活独立于 PI3 激酶途径ä¸çš„其他改å˜ã€‚AKT 的细胞自主激活足以在幼稚的æˆäººå‰åˆ—腺上皮细胞ä¸å¯åŠ¨é«˜çº§ PIN。我们询问激活 AKT 诱导的 PIN 是å¦ä¾èµ–于 AR 的细胞自主信å·ã€‚
为了åŒæ—¶ä¸§å¤± AR å’Œ AKT 活化,用表达 Cre 和肉豆蔻酰化 AKT(myrAKT)的慢病毒或å•ç‹¬è¡¨è¾¾ myrAKT 的慢病毒感染æˆå¹´ AR flox / Y å°é¼ 的解离å‰åˆ—腺上皮细胞(图S7 A )。将这些细胞与 WT 基质结åˆå¹¶ç½®äºŽå‰åˆ—腺体内å†ç”Ÿè¯•éªŒä¸ã€‚在 Cre 感染的移æ¤ç‰©ä¸ RFP 表达较低,表明å‰åˆ—è…ºä¸Šçš®ç»†èƒžä¸ AR 的丧失å¯èƒ½ä¼šå‡å°‘肾å°ç®¡å†ç”Ÿï¼ˆå›¾ S8 A)。在上皮 AR 的情况下 myrAKT çš„è¡¨è¾¾å¯¼è‡´ä¸Šçš®ç»†èƒžå¢žæ®–å¢žåŠ ï¼Œå½¢æˆå›ºä½“巢(图6Aï¼‰ã€‚è¿™äº›ç»†èƒžå¾ˆå¤§ï¼Œå…·æœ‰ä¸°å¯Œçš„ç»†èƒžè´¨å’Œå¢žå¤§çš„æ·±æŸ“ç»†èƒžæ ¸ï¼ˆå›¾6A)。巢的边界光滑且规则,没有入侵迹象(图6A )。这些特å¾ä¸Ž mPIN 的诊æ–一致,å…疫组织化å¦æŸ“色支æŒçš„结论显示外围附近å˜åœ¨ p63 + /CK5 +细胞和巢ä¸å¿ƒå˜åœ¨ CK8 +细胞(图 6 A,f-h)。
图 6。
å‰åˆ—è…ºä¸Šçš®ç»†èƒžä¸ AKT 的细胞自主激活导致 PIN çš„å½¢æˆä¸Žä¸Šçš® AR ä¿¡å·ä¼ å¯¼æ— å…³ã€‚( A ) AKT 在 WT AR ( b ) çš„æƒ…å†µä¸‹çš„ç»†èƒžè‡ªä¸»è¡¨è¾¾å¯¼è‡´ä¸Šçš®å·¢çš„å½¢æˆ ( e ) 具有大é‡ä¸°å¯Œçš„细胞质ã€æ‰©å¤§å’Œæ·±æŸ“çš„ç»†èƒžæ ¸ä»¥åŠæ ¸å¤šå½¢æ€§ ( a )。在增生的上皮细胞ä¸è¯å®žäº† AKT ( c ) 的过表达和磷酸化 AKT ( d ) 的表达。在表达 CK8 的管腔细胞 ( f ) 的外围检测到表达 p63 ( h ) å’Œ CK5 ( g ) 的基底细胞。(乙) 尽管 Cre 介导的 AR ( bå’Œj ) 增生å‰åˆ—腺上皮巢的有效缺失 ( a, e,å’Œi, m ) 与 AKT 的过度表达 ( cå’Œk ) å’Œp-AKT ( då’Œl )。一些增生区域包å«çž¬æ—¶æ‰©å¢žç»†èƒžæ‰©å¢žçš„区域,其病ç¶å¯¹è…” ( f ) 和基底 ( gå’Œh ) æ ‡å¿—ç‰©å‘ˆåŒé˜³æ€§ã€‚其他å°ç®¡å…·æœ‰ mPIN 的特å¾ï¼Œå…·æœ‰å¢žç”Ÿè¡¨åž‹å’Œç”±åŸºåº•ç»†èƒžç»„æˆçš„腺体(oå’Œp ) 周围的腔细胞 ( n )。
当在 AKT 激活(FUCRW-mAKT-Cre 移æ¤ç‰©ï¼‰çš„æƒ…å†µä¸‹åˆ é™¤ AR 时,我们观察到具有与对照相åŒçš„结构和细胞å¦ç‰¹å¾çš„增殖上皮细胞巢,除了巢的大å°è¦å°å¾—多(图 6 B)。å…疫组织化å¦æŸ“色显示在巢周围å˜åœ¨ p63 +细胞(图 6 Bã€hå’Œp),但与 FUCRW-mAKT 移æ¤ç‰©ç›¸æ¯”,一些细胞对 CK5 å’Œ CK8 呈åŒé˜³æ€§ï¼ˆå›¾ 6 Bã€få’Œg ) ),一个已被æ述用于å‰åˆ—腺瞬时放大细胞的特å¾ã€‚
与在 FGF10 å†ç”Ÿç§»æ¤ç‰©ä¸çš„观察结果相å,与对照相比,在上皮 AR 缺失的情况下激活 AKT 导致 Ki67 和细胞周期蛋白 D1 é˜³æ€§ç»†èƒžçš„ç™¾åˆ†æ¯”å¢žåŠ ï¼ˆå›¾ 7)。这些结果表明,尽管 AR 缺失,å‰åˆ—腺上皮细胞ä»ä¼šå“应细胞自主有ä¸åˆ†è£‚ä¿¡å·å¦‚ AKT 激活而å‘生活跃增殖。尽管 AR-null-AKT 引å‘çš„ PIN ç—…å˜æ´»è·ƒå¢žæ®–,但与 WT AR-AKT 引å‘çš„ PIN 相比,它们的总体大å°æ›´å°ï¼ˆå›¾ 6A与图 6B相比))。这些差异ä¸èƒ½é€šè¿‡å¢žåŠ 的细胞凋亡æ¥è§£é‡Šã€‚使用 TUNEL 测定对凋亡细胞进行定é‡æ˜¾ç¤ºï¼Œç”± AKT 引å‘çš„ AR WT å’Œ AR-null PIN æŸä¼¤çš„凋亡率没有显ç€å·®å¼‚(图 S8 B)。
图 7。
在 AKT 激活的情况下,å‰åˆ—è…ºä¸Šçš®ç»†èƒžä¸ AR 的缺失导致增殖和循环细胞数é‡å¢žåŠ 。为了比较增殖细胞的百分比,表达活化 AKT çš„å†ç”Ÿç§»æ¤ç‰©çš„组织切片用 Ki67(Aå’ŒC)和细胞周期蛋白 D1(Bå’ŒD)染色。与 WT AR 腺体相比,éšç€ AKT 的细胞自主激活,在 AR-null 上皮ä¸æ£€æµ‹åˆ°å¢žæ®–(Ki67 阳性)和循环(细胞周期蛋白 D1 阳性)å‰åˆ—è…ºä¸Šçš®çš„ç™¾åˆ†æ¯”å¢žåŠ ã€‚
这些结果表明 AKT å¯åŠ¨çš„ PIN å‘生独立于自主 AR ä¿¡å·ã€‚在 AKT 激活的情况下,上皮 AR 的丧失导致å‰åˆ—è…ºä¸Šçš®ç»†èƒžçš„å¾ªçŽ¯å’Œå¢žæ®–å¢žåŠ ï¼›ç„¶è€Œï¼Œä¸Žå¯¹ç…§ç»„ç›¸æ¯”ï¼ŒPIN ç—…å˜çš„总体大å°æ›´å°ã€‚
讨论
我们æ供的è¯æ®è¡¨æ˜Žä¸Šçš® AR å¯ä»¥ä½œä¸ºè‚¿ç˜¤å¯åŠ¨å或肿瘤抑制åå‘挥作用,其在å‰åˆ—腺肿瘤å‘生ä¸çš„功能å–决于癌症起始信å·ã€‚与以å‰å‘布的模型相比,我们的实验方法的一个主è¦ä¼˜åŠ¿æ˜¯åœ¨æš´éœ²äºŽç™Œç—‡èµ·å§‹ä¿¡å·ï¼ˆè‡ªä¸» AKT 或æ—分泌 FGF10)的åŒæ—¶ï¼Œåœ¨æ‰€æœ‰å‰åˆ—腺上皮(基底和腔)ä¸å®žçŽ° AR 丧失的能力。我们的方法的一个潜在缺点是,由于上皮 AR 的丧失,癌症起始细胞的å‘育和分化å¯èƒ½ä¼šå‡å°‘。为了解决 FGF10 引å‘的肿瘤ä¸çš„这一问题,通过å…许 AR 表达的基础水平å…许å‰åˆ—腺上皮细胞分化的 shRNA 实现了 AR 的部分丢失。我们在 FGF10 模型(Tfmã€AR-knockdown å’Œ AR-loxP)ä¸ä½¿ç”¨çš„所有三ç§å®žéªŒæ–¹æ³•çš„结果表明,AR 在介导对这ç§æ—分泌生长促进信å·çš„å应ä¸å‘挥ç€å…³é”®ä½œç”¨ã€‚类似于 AR åŸºå› æ•²é™¤ (ARKO) TRAMP å°é¼ ,细胞自主AKTå¯ä»¥ç‹¬ç«‹äºŽä¸Šçš®ARå¯åŠ¨PIN。在 AR 上皮缺失åŽï¼ŒAKT 引å‘的肿瘤与 WT 肿瘤的组织å¦ç›¸ä¼¼ï¼Œä½†å°½ç®¡å¢žæ®–指数和活跃循环细胞数é‡è¾ƒé«˜ï¼Œä½†å°ºå¯¸è¾ƒå°ã€‚一些 AR-null AKT å¯åŠ¨çš„ç—…ç¶å…·æœ‰çž¬æ—¶æ‰©å¢žç»†èƒžçš„特å¾ï¼ŒåŒæ—¶è¡¨è¾¾è…”å’ŒåŸºåº•ç»†èƒžæ ‡å¿—ç‰©ã€‚AKT ä¿¡å·å¯¹ PIN çš„å¯åŠ¨å¯èƒ½ä¸Ž AR æ— å…³ï¼Œè€Œç»†èƒžè‡ªä¸» AR ä¿¡å·æ˜¯åœ¨è‚¿ç˜¤ç—…å˜ä¸å»ºç«‹åˆ†åŒ–谱系所必需的。鉴于 ER α çš„ä¿¡å·ä¼ 导也å¯èƒ½åœ¨å‰åˆ—腺癌的å‘生ä¸èµ·é‡è¦ä½œç”¨ï¼Œå¯¹å…¶è¡¨è¾¾è¿›è¡Œäº†æ£€æŸ¥ã€‚在增生性 AR-WT 区域和 AR-null èŽç¼©åŒºåŸŸä¸ï¼ŒERα 在 FGF10 移æ¤ç‰©ä¸çš„表达å‡è¾ƒä½Žï¼ˆå›¾ S9 A)。相å,在 WT AR å’Œ AR-null AKT 引å‘的增生性病å˜ä¸ï¼Œä¸Šçš® ERα 的表达是异质的(图 S9 B)。我们æ出,在这些增生性病å˜ä¸çš„æ¯ä¸€ä¸ªä¸ï¼Œå¯¹ç»†èƒžè‡ªä¸» AR çš„ä¸åŒä¾èµ–性是由于生长促进信å·çš„差异所致。
肿瘤微环境在癌的å‘生ä¸èµ·é‡è¦ä½œç”¨ï¼›å› æ¤ï¼Œé—´è´¨ AR 在å‰åˆ—腺癌的å‘生和å‘展ä¸å¯èƒ½åŒæ ·é‡è¦ã€‚与 ARKO TRAMP 肿瘤相比,在å‰åˆ—腺上皮特异性 ARKO TRAMP å°é¼ ä¸å½¢æˆçš„肿瘤更大,增殖指数更高。这些结果表明,通过基质 AR å‘出的信å·å¯èƒ½å…·æœ‰ä¿ƒè¿›è‚¿ç˜¤çš„作用,但并未通过实验回ç”这个é‡è¦é—®é¢˜ã€‚体内å‰åˆ—è…ºå†ç”Ÿæ¨¡åž‹ç³»ç»Ÿå¯èƒ½æ˜¯æµ‹è¯•åŸºè´¨ AR 在å‰åˆ—腺癌起始和进展ä¸çš„作用的ç†æƒ³å¹³å°ã€‚
鉴于å‰åˆ—è…ºç™Œå½±å“ 6 å男性ä¸çš„ 1 åï¼Œå› æ¤åº”探索这ç§ç–¾ç—…的化å¦é¢„防措施,尤其是在å‘生å‰åˆ—腺肿瘤的高风险患者ä¸ã€‚在两项éšæœºå‰çž»æ€§è¯•éªŒä¸ï¼Œä½¿ç”¨ 5-α-还原酶抑制剂(阻æ–ç¾é…®è½¬åŒ–为二氢ç¾é…®ï¼Œä¸€ç§æ›´æœ‰æ•ˆçš„ AR é…体)显示å‰åˆ—腺癌å‘病率的相对风险é™ä½Žäº†çº¦ 20%。这些临床试验表明,å‰åˆ—腺癌的化å¦é¢„防是å¯ä»¥å®žçŽ°çš„。å‰åˆ—腺癌的自然生物å¦ï¼Œé€šå¸¸å…·æœ‰ä»Žç™Œå‰ç—…å˜ (PIN) 开始的长期临床过程,也为化å¦é¢„防æ供了独特的机会。更好地了解é—ä¼ æ˜“æ„Ÿå› ç´ å’Œå¯èƒ½è¿›å±•ä¸ºæµ¸æ¶¦æ€§ç™Œç—‡çš„癌å‰ç—…å˜çš„分å谱,å¯ä»¥ä¸ºè¯†åˆ«å¯èƒ½ä»ŽåŒ–å¦é¢„防ä¸å—益的患者æ供有价值的è§è§£ã€‚å°½ç®¡ä¼ ç»Ÿè®¤ä¸º AR 在驱动å‰åˆ—腺肿瘤å‘生ä¸èµ·æ ¸å¿ƒä½œç”¨ï¼Œä½†æŠ—é›„æ¿€ç´ çš„ç»™è¯å¯èƒ½éœ€è¦ä¸ªä½“化以实现临床益处。
æ料和方法实验动物。
æ ¹æ®åŠ 州大å¦æ´›æ‰çŸ¶åˆ†æ ¡ (UCLA) 实验动物医å¦ç³»æ‰¹å‡†çš„方案饲养å°é¼ ,并在 UCLA åŠ¨ç‰©ç ”ç©¶å§”å‘˜ä¼šæ‰¹å‡†ä¸‹è¿›è¡ŒåŠ¨ç‰©å®žéªŒã€‚è¡¨ S1å’ŒSI æ料和方法ä¸æ述了交é…å’ŒåŸºå› åˆ†åž‹ã€‚
质粒。
æ述了 MSCV-IRES-GFP å’Œ MSCV-FGF10-IRES-GFP 质粒。SI æ料和方法ä¸æ述了载体构建的细节。
å‰åˆ—腺和基质细胞的å‰åˆ—è…ºå†ç”Ÿå’Œç—…毒感染。
å·²ç»æ述了å‰åˆ—腺上皮和基质细胞的å†ç”Ÿå’Œç—…毒感染。UGSE å’Œ UGSM 的解剖和分离基于已å‘布的å议。为了产生 FGF10 UGSM,WT UGSM 感染了表达 FGF10 å’Œé¢œè‰²æ ‡è®°ç»¿è‰²è§å…‰è›‹ç™½ (GFP) 的逆转录病毒。
å…疫组织化å¦ã€‚
如所述 ( 31 )在 10% 缓冲ç¦å°”马林ä¸å›ºå®šç»„ç»‡æ ·æœ¬ï¼Œç„¶åŽåœ¨ä¹™é†‡ä¸è¿›è¡Œã€‚SI æ料和方法ä¸æ述了å…疫染色的详细信æ¯ã€‚
激光æ•èŽ·æ˜¾å¾®åˆ‡å‰²ã€‚
LCM 通过使用 Arcturus PixCell IIe 机器进行。æ¥è‡ª LCM 组织的 Cre 检测在SI æ料和方法ä¸æœ‰è¯¦ç»†è¯´æ˜Žã€‚
æµå¼ç»†èƒžä»ªã€‚
将解离的å‰åˆ—腺细胞悬浮在 DMEM/10% FBS ä¸ï¼Œå¹¶åœ¨ BD FACS Aria II 上进行细胞分选。对于 CD49f 分选,细胞在 4°C 下用 PE ç¼€åˆçš„抗å°é¼ CD49f (BD Pharmingen 555736) 染色 30 分钟。
增殖和凋亡的é‡åŒ–。
在æ¯ç§æƒ…况下(至少 300 个总细胞)对三个å•ç‹¬çš„移æ¤ç‰©è®¡æ•° Cyclin D1ã€Ki67 或 TUNEL 阳性上皮细胞的百分比并å–å¹³å‡å€¼ã€‚误差线对应于±SD。使用åŒå°¾t检验æ¥ç¡®å®šç»Ÿè®¡å¦æ„义。
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